[發(fā)明專利]一種利用SSR引物鑒定西蘭花品種的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202011470941.3
• 申請日: 2020-12-14
• 公開（公告）號: CN112575105B
• 公開（公告）日: 2022-08-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 鄭強(qiáng);邵偉偉;李金枝
• 申請（專利權(quán)）人: 麗水學(xué)院
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/6858;C12N15/11;G16B50/00
• 代理公司: 浙江千克知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 33246
• 代理人: 吳斌林

一種利用SSR引物鑒定西蘭花品種的方法，利用聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測與熒光電泳分型檢測法，對蕓薹屬875對SSR引物進(jìn)行多態(tài)性篩選，最終確定了28對引物作為西蘭花品種真實(shí)性鑒定的核心SSR引物。在此基礎(chǔ)上，構(gòu)建了48份國內(nèi)外重要西蘭花品種的DNA指紋圖譜庫。該圖譜庫以西蘭花品種編號、擴(kuò)增位點(diǎn)名稱以及“0”、“1”陣列為基礎(chǔ)制得，其中“0”代表在相應(yīng)擴(kuò)增位點(diǎn)無擴(kuò)增條帶，“1”代為在相應(yīng)擴(kuò)增位點(diǎn)有擴(kuò)增條帶，每一西蘭花品種均有包含28個(gè)位點(diǎn)信息的指紋代碼，具有唯一性，每一個(gè)指紋代碼可作為一個(gè)品種的標(biāo)識。西蘭花品種的真實(shí)性鑒定可采用DNA指紋圖譜庫法或?qū)φ掌贩N比對法。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種利用SSR分子標(biāo)記鑒定西蘭花品種的真實(shí)性的方法。

背景技術(shù)

目前，農(nóng)作物的品種鑒定方法主要包括形態(tài)學(xué)鑒定法、物理化學(xué)鑒定法、生化鑒定法和DNA分子標(biāo)記法等。形態(tài)學(xué)鑒定法耗時(shí)長，易受環(huán)境條件的影響，且鑒定結(jié)果具有一定的主觀性；物理化學(xué)鑒定法與生化鑒定法在應(yīng)用范圍上有較大的局限，對于遺傳相近的品種往往難以區(qū)分；DNA分子標(biāo)記法通過直接分析不同品種在DNA水平的差異來進(jìn)行品種鑒定，具有快速、高效、準(zhǔn)確、易實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化等眾多優(yōu)點(diǎn)，因此越來越受到重視。DNA分子標(biāo)記技術(shù)包括AFLP(Amplified Fragment Length Polymorphism)、RFLP(Restriction FragmentLength Polymorphism)、RADP(Random Amplified Polymorphic DNA)、SSR(SimpleSequence Repeats)、ISSR(Inter-Simple Sequence Repeats)、SRAP(Sequenced-relatedamplified polymorphism)和SNP(Single Nucleotide Polymorphism)等。盡管上述這些分子標(biāo)記技術(shù)在物種遺傳多樣性分析、指紋圖譜構(gòu)建、連鎖圖繪制、分子輔助育種等領(lǐng)域均有廣泛應(yīng)用，但多數(shù)并不適用于親緣關(guān)系較近的不同栽培種之間的品種真實(shí)性的快速鑒定：如RFLP標(biāo)記技術(shù)操作復(fù)雜、難度大，且需使用放射性同位素；AFLP操作要求與實(shí)驗(yàn)成本都很高，且受歐洲專利保護(hù)，限制了該技術(shù)的應(yīng)用；RAPD為顯性遺傳，不能有效區(qū)分雜合子與純合子，且結(jié)果重復(fù)性較差；ISSR同樣為顯性遺傳，且PCR擴(kuò)增中非特異性條帶多，對結(jié)果判斷有較大的干擾。

SSR(Simple Sequence Repeats)又稱為微衛(wèi)星DNA，是由幾個(gè)(多為1-6個(gè))核苷酸串聯(lián)重復(fù)成數(shù)十至數(shù)百堿基大小的DNA片段，DNA復(fù)制過程中，因堿基錯(cuò)配而產(chǎn)生一個(gè)或幾個(gè)重復(fù)單位的變化，從而導(dǎo)致等位變異的產(chǎn)生。由于SSR兩側(cè)是保守的堿基序列，因此可設(shè)計(jì)引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，進(jìn)而獲取這些重復(fù)序列的多態(tài)性信息，用于不同物種的區(qū)分。SSR標(biāo)記具有多態(tài)性豐富、共顯性遺傳、穩(wěn)定性與重復(fù)性好、技術(shù)簡單易用操作等特點(diǎn)，因而在指紋圖譜的構(gòu)建與品種真實(shí)性鑒定方面得到廣泛應(yīng)用。

國內(nèi)已經(jīng)建立了水稻、玉米、馬鈴薯及甘藍(lán)型油菜等重要經(jīng)濟(jì)作物的基于SSR分子標(biāo)記進(jìn)行品種鑒定的技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)，為不同產(chǎn)區(qū)來源與不同經(jīng)銷來源的種子提供了一套統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)化規(guī)范操作，為解決爭議、保護(hù)育種權(quán)益、規(guī)范市場奠定了良好的基礎(chǔ)。但目前尚未見基于SSR分子標(biāo)記法對西蘭花進(jìn)行真實(shí)性鑒定的技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)，也未見可用于西蘭花真實(shí)性鑒定的SSR核心引物組合的相關(guān)報(bào)道，因此，篩選出一組SSR核心引物組合并開發(fā)一套西蘭花品種真實(shí)性鑒定的SSR分子標(biāo)記技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)或規(guī)程，代替繁瑣、耗時(shí)的田間種植與形態(tài)鑒定的傳統(tǒng)方法，用于西蘭花品種真實(shí)性的快速、高效、準(zhǔn)確鑒定，具有重要意義。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明要解決上述現(xiàn)有技術(shù)存在的問題，提供了一種利用SSR分子標(biāo)記鑒定西蘭花品種的真實(shí)性的方法，篩選一組西蘭花SSR核心引物組合并開發(fā)一套西蘭花品種真實(shí)性鑒定的SSR分子標(biāo)記技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)或規(guī)程，代替繁瑣、耗時(shí)的田間種植與形態(tài)鑒定的傳統(tǒng)方法，用于西蘭花品種真實(shí)性的快速、高效、準(zhǔn)確鑒定。