[發明專利]一種利用SSR引物鑒定西蘭花品種的方法

有效

• 申請號: 202011470941.3
• 申請日: 2020-12-14
• 公開（公告）號: CN112575105B
• 公開（公告）日: 2022-08-19
• 發明（設計）人: 鄭強;邵偉偉;李金枝
• 申請（專利權）人: 麗水學院
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/6858;C12N15/11;G16B50/00
• 代理公司: 浙江千克知識產權代理有限公司 33246
• 代理人: 吳斌林

1.一種利用SSR引物鑒定西蘭花品種的方法，包括48份西蘭花品種，其特征是：利用分散在西蘭花9對染色體上的28對核心SSR引物組合對西蘭花品種的真實性進行鑒定的SSR分子標記技術，主要包括有西蘭花核心SSR引物的篩選、西蘭花品種指紋圖譜庫的構建和西蘭花品種的SSR鑒定方法；

所述西蘭花品種的SSR鑒定方法包括DNA指紋圖譜庫法或對照品種對比法兩種方案，利用所述28對核心SSR引物組合擴增獲得西蘭花品種的DNA指紋信息數據，根據DNA指紋圖譜庫法或對照品種比對法對待測品種的真實性進行鑒定；

所述分散在西蘭花9對染色體上的28對核心SSR引物組合包括BoGMS1162、BoE041、Na10H03c、BoSF239、BoSF2725、BoGMS0665、BnEMS0287、CB10057、BoE718、MR049B、BRMSo71、CB10288、BoE891、BoSF259、BoGMS0949、CB10526、CB10234、Na12A02、BoE723、BoE875、OL11Bo5、CNU400、CB10028、CB10139、CB10064、BoSF2206、BoSF2686、BoGMS0847；

所述DNA指紋圖譜庫法的主要步驟如下：

步驟1、利用試劑盒法提取待鑒定西蘭花品種的基因組DNA；

步驟2、以28對核心SSR引物對其進行PCR擴增，利用熒光電泳分型檢測平臺分析該品種在28個擴增位點的擴增信息，以品種編號、擴增位點名稱以及“0”、“1”陣列為基礎表征該品種的指紋信息數據；

步驟3、將待鑒定品種的DNA指紋信息數據與48份西蘭花品種的DNA指紋圖譜庫進行搜索比對，若待鑒定品種的DNA指紋信息數據與西蘭花DNA指紋圖譜庫中的某個品種信息一致，則可判斷待鑒定品種與指紋圖譜庫中的該品種為同一品種；若待鑒定品種的DNA指紋信息數據與西蘭花DNA指紋圖譜庫中的48份西蘭花品種的指紋信息均不一致，則可判斷待鑒定品種不屬于48份西蘭花品種中的任一品種；

所述對照品種對比法的主要步驟如下：

步驟1、利用試劑盒法分別提取待鑒定西蘭花品種與對照品種的基因組DNA；

步驟2、以28對核心SSR引物對兩者進行PCR擴增，利用熒光電泳分型檢測平臺分析待鑒定品種與對照品種在28個擴增位點的擴增信息，以品種編號、擴增位點名稱以及“0”、“1”陣列為基礎表征待鑒定品種與對照品種的指紋信息數據；

步驟3、將待鑒定品種與對照品種的DNA指紋信息數據進行比較，若兩者的指紋信息數據相同，則可判定待鑒定品種與對照品種為相同品種；若兩者的指紋信息數據不同，則判定待鑒定品種與對照品種為不同品種；

48份西蘭花品種信息如下：

48份西蘭花品種的DNA指紋圖譜，包含10個擴增位點，信息如下：

48份西蘭花品種的DNA指紋圖譜庫，信息如下：

。

2.根據權利要求1所述的一種利用SSR引物鑒定西蘭花品種的方法，其特征是：所述西蘭花核心SSR引物的篩選的主要步驟如下：

步驟1、按照蕓薹屬SSR數據庫網站提供的蕓薹屬引物信息合成SSR引物875對，作為備選SSR引物；

步驟2、以12份遺傳差異性較大的西蘭花品種作為篩選材料，利用試劑盒法從12份西蘭花種子中提取基因組DNA；

步驟3、采用降落式PCR程序，以875對引物對12份西蘭花篩選材料進行擴增，通過6％變性聚丙烯酰胺凝膠電泳結合硝酸銀快速染色法進行檢測，從中初步篩選出擴增帶型清晰、多態性豐富的候選核心引物；

步驟4、采用熒光PCR，以步驟3中的候選核心引物對48份西蘭花品種材料進行擴增，通過熒光電泳分型檢測平臺，從候選核心引物中進一步復篩得到最終的核心SSR引物。