[發明專利]一種檢測轉基因植物中目的基因表達的通用引物及檢測方法

在審

• 申請號: 202011470910.8
• 申請日: 2018-06-20
• 公開（公告）號: CN112592995A
• 公開（公告）日: 2021-04-02
• 發明（設計）人: 王喜慶;劉芳;莊軍紅
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/6851;C12N15/11
• 代理公司: 北京市金杜律師事務所 11256
• 代理人: 孟凡宏

本發明公開了一種檢測轉基因植物中目的基因表達的通用引物及檢測方法。本發明提供了一種檢測轉基因植物中導入的外源目的基因表達的物質，為如下：1)序列1或序列1第1?93位所示的DNA片段；2)用于擴增1)所示DNA片段的引物對；3)含有2)所示引物對的PCR試劑或試劑盒。發明人通過對轉基因材料cDNA進行3’RACE，首次證明外源基因轉錄后緊密相連有一小段載體序列(該序列見序列表1)，即NOS終止子部分序列。由于NOS終止子是轉基因研究中常用的終止子，基于此研究結果，本發明針對該載體序列片段設計了通用引物，根據該載體序列表達量預測外源基因表達量，可以快速從大量轉基因個體中篩選出高效表達外源基因的轉基因個體或品種。

本申請是申請日為2018年6月20日，發明名稱為“一種檢測轉基因植物中目的基因表達的通用引物及檢測方法”，申請號為201810636371.7的發明專利申請的分案申請。

技術領域

本發明涉及分子生物學領域，尤其涉及一種檢測轉基因植物中目的基因表達的通用引物及檢測方法。

背景技術

自1996年首例轉基因農作物產業化應用以來，全球轉基因技術研究與產業應用已進入一個規模化集成應用的新階段。隨著轉基因產業化進程的推進，相應的轉基因檢測方法也從原來檢測單個目標基因發展到多物種多基因同時檢測的程度并繼續向著高通量檢測的方向發展。

大多數情況下，外源基因一般都是隨機插入宿主基因組中，而不同插入位點的外源基因表達量會存在差異。因此，轉基因研究中必須對大量的轉基因個體進行基因表達量檢測，以篩選、獲得外源基因大量表達的轉基因生物。常規基因表達量分析方法是采用針對外源基因設計的特異引物，而這種方法存在以下問題，嚴重制約了轉基因生物的開發和利用:1)針對每個外源基因都要設計基因特異引物并優化反應條件，難以實現高通量檢測；2)若外源基因在該宿主基因組中有同源基因，通常很難設計基因特異引物進行特異擴增；3)若外源基因是宿主基因組中本身含有的基因，則基因特異引物無法區分轉入的目的基因表達量與宿主本底的基因表達量；4)若外源基因是宿主基因組中本身含有的基因，而且宿主基因組中該基因本底表達水平已很高，這樣就會造成檢測結果顯示該轉入基因沒有過量表達，從而對轉入基因是否表達造成誤判。

雖然DNA水平上已有通過CaMV35S啟動子和NOS終止子的序列檢測轉基因是否轉入宿主基因組的專利，但未有RNA水平上通過CaMV35S啟動子和NOS終止子的序列檢測轉基因表達量的專利。浙江大學鐘伯雄等人發明了一種用標記基因預測外源基因表達量及篩選轉基因生物的方法(申請號：201410678673.2，公布號：CN104404072A)，但標記基因與外源基因有時會分別插入到宿主基因組的非連鎖位點上，這就會導致誤判；最重要的是，由于標記基因可能帶來某些潛在威脅，無選擇標記轉基因已成為轉基因技術研究的重點。

發明內容

本發明一個目的是提供一種檢測轉基因植物中導入的外源目的基因表達的物質。

本發明提供的物質，為如下：

1)序列1或序列1第1-93位所示的DNA片段；

2)用于擴增1)所示DNA片段的引物對；

3)含有2)所示引物對的PCR試劑或試劑盒。

上述物質中，所述引物對由序列2所示的單鏈DNA分子和序列3所示的單鏈DNA分子組成。

上述的物質在檢測轉基因植物中導入的外源目的基因是否表達中的應用也是本發明保護的范圍；

或上述的物質在制備檢測轉基因植物中導入的外源目的基因是否表達產品中的應用也是本發明保護的范圍。

上述的物質在檢測轉基因植物中導入的外源目的基因的表達量中的應用也是本發明保護的范圍；

或上述的物質在制備檢測轉基因植物中導入的外源目的基因的表達量產品中的應用也是本發明保護的范圍。