[發明專利]鑒別水貂犬瘟熱病毒、水貂細小病毒、水貂阿留申病毒及偽狂犬病毒的四重PCR引物組

有效

• 申請號: 202011467977.6
• 申請日: 2020-12-14
• 公開（公告）號: CN112391501B
• 公開（公告）日: 2023-09-15
• 發明（設計）人: 張海玲;白雪;廉士珍;胡博;張蕾;李偉;張東亮;李虹曄;李雙雙;李紫仟
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院特產研究所
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 北京科龍寰宇知識產權代理有限責任公司 11139
• 代理人: 馬鑫

1.一種鑒別水貂犬瘟熱病毒(Canine?Distemper?Virus，CDV)、水貂細小病毒(又稱水貂腸炎病毒，Mink?Enteritis?Virus，MEV)、水貂阿留申病毒(Aleutian?Mink?DiseaseVirus，AMDV)以及偽狂犬病毒(Pseudorabies?Virus，PRV)的四重PCR引物組，所述的引物組由分別用于擴增水貂犬瘟熱病毒、水貂細小病毒、水貂阿留申病毒以及偽狂犬病毒基因組片段的四對引物組成，其核苷酸序列如下所示：

CDV1：5’-GATAAAGCATGTCATTATAGTCCTAA-3’；

CDV2：5’-CTTGAGCTTTCGACCCTTC-3’；

MEV1:5’-CAGGTGATGAATTTGCTACAGGAAC-3’；

MEV2:5’-ACAAATGGTGCATTTACATGAAGTC-3’；

ADV1：5’-CACTGGGCTTTGTTCCTT-3’；

ADV2：5’-TTACCTCTTTCCTCACCC-3’；

PRV1：5’-GTTCGTGCGCTACTCCTCCGC-3’；

PRV2：5’-AGGTCGACCACGGTGCCGTT-3’。

2.權利要求1所述的四重PCR引物組在制備檢測水貂、貉或狐來源的CDV、MEV、AMDV及PRV試劑中的應用。

3.一種鑒別水貂犬瘟熱病毒、水貂細小病毒、水貂阿留申病毒以及偽狂犬病毒的四重PCR檢測試劑盒，其特征在于：該試劑盒包含權利要求1所述的四重PCR引物組。

4.如權利要求3所述的四重PCR檢測試劑盒，其特征在于，所述的試劑盒中還含有2×ExTaq?Buffer，one?step?enzyme?mix以及滅菌水。

5.如權利要求3所述的四重PCR檢測試劑盒，其特征在于，PCR反應體系為：2×Ex?TaqBuffer?15μL，權利要求1所述的引物CDV1、CDV2、MEV1、MEV2、ADV1、ADV2、PRV1、PRV2各0.5μL，核酸模板2μL，余量用滅菌水補足至30μL。

6.如權利要求3所述的四重PCR檢測試劑盒，其特征在于，PCR反應程序為：45℃，30min；95℃預變性3min；94℃40s，54℃30s，72℃30s，共計34個循環；最后72℃延伸7min。

7.一種鑒別水貂犬瘟熱病毒、水貂細小病毒、水貂阿留申病毒以及偽狂犬病毒的四重PCR檢測方法，所述的方法不用于疾病的診斷目的，其特征在于，包括下列步驟：

1)使用商品化的病毒DNA/RNA提取試劑盒從樣品中提取核酸；

2)以提取的核酸為模板，用權利要求1中所述的引物組進行PCR擴增反應，獲得擴增產物；

3)將PCR擴增產物進行瓊脂糖凝膠電泳分析，在凝膠成像系統下觀察結果。

8.根據權利要求7所述的四重PCR檢測方法，其特征在于，步驟2)中PCR反應體系為：2×Ex?Taq?Buffer?15μL，引物CDV1、CDV2、MEV1、MEV2、ADV1、ADV2、PRV1、PRV2各0.5μL，核酸模板2μL，用無RNA酶滅菌水補足至30μL。

9.根據權利要求7所述的四重PCR檢測方法，其特征在于，步驟2)中PCR反應程序：45℃，30min；95℃預變性3min；94℃40s，54℃30s，72℃30s，共計34個循環；最后72℃延伸7min。