[發(fā)明專利]基于斑馬魚幼魚成像模型評價(jià)緩解食源性腸炎成分的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202011464150.X
• 申請日: 2020-12-17
• 公開（公告）號: CN112997926B
• 公開（公告）日: 2021-12-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 夏曉勤;吳南;黎明;程瑩寅
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院水生生物研究所
• 主分類號: A01K61/10
• 分類號: A01K61/10;A23K50/80;A23K10/30;A23K10/22;A23K10/37;G01N21/64;G01N21/84
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務(wù)所(普通合伙) 42001
• 代理人: 江麗麗

1.基于斑馬魚幼魚成像模型評價(jià)緩解食源性腸炎成分的方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）先天免疫細(xì)胞熒光標(biāo)記的斑馬魚幼魚成像分析

將轉(zhuǎn)基因斑馬魚Tg(lyz:DsRED2)和Tg(mpeg1:EGFP)雜交獲得中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞雙標(biāo)記的轉(zhuǎn)基因斑馬魚Tg(lyz:DsRED2/mpeg1:EGFP)，孵化5天后雙標(biāo)記的轉(zhuǎn)基因斑馬魚幼苗分成3組投喂實(shí)驗(yàn)飼料，分別為魚粉組、50%豆粕替代蛋白源飼料組、50%豆粕替代蛋白源飼料組+待測成分，投喂4天，第9天將不同處理組的魚苗在激光共聚焦顯微鏡下進(jìn)行活體成像，分析腸道紅色熒光標(biāo)記的中性粒細(xì)胞和綠色熒光標(biāo)記的巨噬細(xì)胞的數(shù)量及形態(tài)變化；

（2）后天免疫細(xì)胞熒光標(biāo)記的斑馬魚幼魚成像分析

將淋巴細(xì)胞標(biāo)記品系Tg (rag2:DsRed)或T淋巴細(xì)胞標(biāo)記品系Tg(lck:lck-eGFP)純合子成魚分別與野生型斑馬魚側(cè)交獲得雜合子，孵化5天后投喂幼魚商品飼料直至17天，第17天將這些轉(zhuǎn)基因斑馬魚分成3組開始投喂實(shí)驗(yàn)飼料，分別為魚粉組、50%豆粕替代蛋白源飼料組、50%豆粕替代蛋白源飼料組+待測成分，獲得食源性腸炎的斑馬魚幼魚后天免疫分析模型，第27天將該不同處理組的魚苗在激光共聚焦顯微鏡下進(jìn)行活體成像，分析腸道紅色熒光標(biāo)記的淋巴細(xì)胞和綠色熒光標(biāo)記的成熟T淋巴細(xì)胞的數(shù)量及形態(tài)變化；

（3）斑馬魚幼魚腸道切片成像分析

按照步驟（2）所述方法建立食源性腸炎的斑馬魚幼魚后天免疫分析模型，取第27天的魚苗進(jìn)行中后腸組織切片HE染色病理分析，包括固有層厚度、腸道絨毛褶皺程度和隱窩深度。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟（1）、（2）和（3）中分析中后腸的粘膜組織中免疫細(xì)胞聚集程度和組織學(xué)病理。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，與50%豆粕替代蛋白源飼料組相比，步驟（1）和（2）的處理組中若免疫細(xì)胞數(shù)量變少及聚集程度降低，步驟（3）中固有層恢復(fù)至正常厚度以及腸粘膜褶皺程度恢復(fù)，隱窩深度明顯，則表明待測成分具有緩解食源性腸炎的作用。