[發明專利]利用地中海擬無枝酸菌發酵生產利福霉素的培養基和培養方法

在審

• 申請號: 202011461655.0
• 申請日: 2020-12-14
• 公開（公告）號: CN112410270A
• 公開（公告）日: 2021-02-26
• 發明（設計）人: 李小萍
• 申請（專利權）人: 寧夏泰勝生物科技有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12P17/18;C12R1/01
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明涉及一種利用獸疫鏈球菌發酵生產利福霉素的培養基和培養方法，本發明在培養基中引入了脫脂蠶蛹粉、魚熔漿蛋白粉和產朊假絲酵母蛋白粉，利用這三種物質組成新的培養基配方，確認了利用地中海擬無枝酸菌發酵生產利福霉素的種子培養基、發酵培養基中碳源、氮源和最佳配伍比例利，以此為基礎，其大生產的發酵技術水平是32000μg/ml，處于國內領先水平。

技術領域

本發明屬于生物發酵技術領域，特別是涉及一種利用地中海擬無枝酸菌發酵生產利福霉素的培養基和培養方法。

背景技術

利福霉素是由地中海擬無枝酸菌產生的一類安莎大環內酯類抗生素。這類抗生素的毒性低、療效高且抗菌譜較廣，廣泛應用于治療G+(革蘭氏陽性菌)、結核病、麻風病和與艾滋病有關的分枝桿菌感染。

從20世紀50年代末期發現利福霉素之后，國際國內很多專家學者對其結構性質及其發酵工藝進行了大量的研究，促使其發酵單位有了很大的提升，但近年來我國利福霉素的工業化水平提高緩慢，主要原因是我國利福霉素的生產采用三級發酵模式，該方式存在如下問題：

1 目前，相關文獻資料報道了國內利福霉素發酵單位一般在10000～20000μg/ml。各個利福霉素生產企業發酵技術水平差別較大。

2 現有技術中，利福霉素培養基的碳源主要采用葡萄糖，葡萄糖1）在培養基高溫滅菌過程中容易被碳化；2）生產反應過程中易產生“美拉德反應”，即產生抑制菌體的有毒物質，從而影響發酵效價。

3 國內利福霉素發酵技術中，有些在培養基組成中加入了動物蛋白胨，發酵培養結束，發酵液中殘留了部分動物蛋白，增加了發酵液的粘度，增加了該產品下游工藝提取和純化的難度。

發明內容

本發明的目的就在于克服上述現有技術的缺陷，提供一種可有效提高發酵單位，同時降低生產成本，降低提取純化難度的利用地中海擬無枝酸菌發酵生產利福霉素的培養基。

本發明的另一目的是提供利用上述培養基發酵生產利福霉素的培養方法。

為實現上述目的所采取的技術方案為：

一種利用地中海擬無枝酸菌發酵生產利福霉素的培養基，其特征在于包括一級種子培養基、二級種子培養基和發酵培養基，其中

所述一級培養基組成為：木薯淀粉28～32g/L、脫脂蠶蛹粉23～27g/L、魚熔漿蛋白粉42～46g/L、玉米漿干粉53-57g/L、硫酸銨0.4～0.8g/L、輕質碳酸鈣1～5g/L；

所述二級種子培養基的組成為：

木薯淀粉37～41g/L、脫脂蠶蛹粉24～28g/L、魚熔漿蛋白粉43～48g/L、玉米漿干粉55～59g/L、硫酸銨0.5～0.9g/L、輕質碳酸鈣1～5g/L；

所述發酵培養基的組成為：

木薯淀粉48～52g/L、脫脂蠶蛹粉20～24g/L、魚熔漿蛋白粉31～35g/L、玉米漿干粉62～66g/L、產朊假絲酵母蛋白粉18～22g/L、硫酸銨0.5～0.9g/L、輕質碳酸鈣1～5g/L、磷酸二氫鉀0.1～0.5g/L、氯化鈉0.002～0.006g/L、硫酸鋅0.03～0.07g/L、硫酸亞鐵0.1～0.5g/L、硫酸錳0.003～0.007g/L，椰油酰胺基丙基甜菜堿0.1～0.5g/L、硝酸鉀0.2～0.6g/L、聚醚改性硅油2～6ml/L。

2、一種利用權利要求1所述培養基發酵生產利福霉素的培養方法，其特征在于其工藝步驟為：

1） 一級種子培養：先將一級種子培養基滅菌并冷卻至室溫，并用無菌空氣保壓，然后在火焰保護下，將已經培養好的利福霉素搖瓶發酵液接入一級種子培養基中進行種子培養，至菌體濃度17～21%移種；