[發(fā)明專利]利用地中海擬無(wú)枝酸菌發(fā)酵生產(chǎn)利福霉素的培養(yǎng)基和培養(yǎng)方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011461655.0
• 申請(qǐng)日: 2020-12-14
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN112410270A
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-02-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李小萍
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 寧夏泰勝生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12N1/20
• 分類號(hào): C12N1/20;C12P17/18;C12R1/01
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

1.一種利用地中海擬無(wú)枝酸菌發(fā)酵生產(chǎn)利福霉素的培養(yǎng)基，其特征在于包括一級(jí)種子培養(yǎng)基、二級(jí)種子培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基，其中

所述一級(jí)培養(yǎng)基組成為：木薯淀粉28～32g/L、脫脂蠶蛹粉23～27g/L、魚(yú)熔漿蛋白粉42～46g/L、玉米漿干粉53-57g/L、硫酸銨0.4～0.8g/L、輕質(zhì)碳酸鈣1～5g/L；

所述二級(jí)種子培養(yǎng)基的組成為：

木薯淀粉37～41g/L、脫脂蠶蛹粉24～28g/L、魚(yú)熔漿蛋白粉43～48g/L、玉米漿干粉55～59g/L、硫酸銨0.5～0.9g/L、輕質(zhì)碳酸鈣1～5g/L；

所述發(fā)酵培養(yǎng)基的組成為：

木薯淀粉48～52g/L、脫脂蠶蛹粉20～24g/L、魚(yú)熔漿蛋白粉31～35g/L、玉米漿干粉62～66g/L、產(chǎn)朊假絲酵母蛋白粉18～22g/L、硫酸銨0.5～0.9g/L、輕質(zhì)碳酸鈣1～5g/L、磷酸二氫鉀0.1～0.5g/L、氯化鈉0.002～0.006g/L、硫酸鋅0.03～0.07g/L、硫酸亞鐵0.1～0.5g/L、硫酸錳0.003～0.007g/L，椰油酰胺基丙基甜菜堿0.1～0.5g/L、硝酸鉀0.2～0.6g/L、聚醚改性硅油2～6ml/L。

2.一種利用權(quán)利要求1所述培養(yǎng)基發(fā)酵生產(chǎn)利福霉素的培養(yǎng)方法，其特征在于其工藝步驟為：

1） 一級(jí)種子培養(yǎng)：先將一級(jí)種子培養(yǎng)基滅菌并冷卻至室溫，并用無(wú)菌空氣保壓，然后在火焰保護(hù)下，將已經(jīng)培養(yǎng)好的利福霉素?fù)u瓶發(fā)酵液接入一級(jí)種子培養(yǎng)基中進(jìn)行種子培養(yǎng)，至菌體濃度17～21%移種；

2） 二級(jí)種子培養(yǎng)：先將二級(jí)種子培養(yǎng)基滅菌并冷卻至室溫，并用無(wú)菌空氣保壓，將已經(jīng)培養(yǎng)好的一級(jí)種子培養(yǎng)基移入二級(jí)種子培養(yǎng)基中進(jìn)行二級(jí)種子培養(yǎng)，至菌體濃度18～22%移種；

3） 發(fā)酵培養(yǎng)：先將發(fā)酵培養(yǎng)基滅菌，冷卻至室溫，并用無(wú)菌空氣保壓，然后將培養(yǎng)好的二級(jí)種子液移入發(fā)酵培養(yǎng)基進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，至利福霉素化學(xué)效價(jià)＞32000μg/ml時(shí)終止發(fā)酵。

3.按照權(quán)利要求2所述的培養(yǎng)方法，其特征在于所述培養(yǎng)好的利福霉素?fù)u瓶發(fā)酵液菌體濃度為22～26%；鏡檢無(wú)雜菌。

4.按照權(quán)利要求3所述的培養(yǎng)方法，其特征在于

所述一級(jí)種子培養(yǎng)條件為：罐壓0.03～0.05MPa；罐溫27～28℃；空氣流量20～40m³/h，攪拌轉(zhuǎn)速60～80r/min；

所述二級(jí)種子培養(yǎng)條件為：罐壓0.03～0.05MPa；罐溫27～28℃；空氣流量40～60m³/h；攪拌轉(zhuǎn)速60～80r/min；

所述發(fā)酵培養(yǎng)條件為：

a 培養(yǎng)基初始pH：發(fā)酵培養(yǎng)基滅菌后pH控制在7.3-7.4；

b 溫度：27～28℃；

c 攪拌轉(zhuǎn)速：轉(zhuǎn)速控制在80-100r/min；

d 壓力控制：罐壓0.05～0.06MPa；

e pH控制：發(fā)酵過(guò)程中pH控制在7.2-7.9；

f 空氣流量：150～200m³/h；

h 溶氧控制：

發(fā)酵前40h，不控制溶氧；

40h～120h：溶氧控制在40%以上。

5.按照權(quán)利要求3所述的培養(yǎng)方法，其特征在于所述發(fā)酵過(guò)程中采用流加法進(jìn)行補(bǔ)料，補(bǔ)料包括補(bǔ)丙酸銨、補(bǔ)水、補(bǔ)木薯淀粉，其中

a 補(bǔ)丙酸銨工藝控制：

發(fā)酵周期40h時(shí)，補(bǔ)入丙酸銨，控制其在發(fā)酵液中的濃度控制在0.01～0.05g/L；

b 補(bǔ)水工藝控制：

發(fā)酵時(shí)間在40～120h，當(dāng)菌體濃度超過(guò)26%時(shí)，加入滅菌水，補(bǔ)入量以控制菌體濃度在22～25%為宜；

發(fā)酵時(shí)間在120h～發(fā)酵結(jié)束，加入滅菌水，補(bǔ)入量以控制發(fā)酵液體積為發(fā)酵罐的75-80%為宜；

c 補(bǔ)入木薯淀粉：

發(fā)酵40-120h，當(dāng)總糖含量＜10mg/100ml時(shí)，補(bǔ)入已滅菌的木薯淀粉溶液，使總糖的含量控制在10～15mg/100ml。