[發(fā)明專利]細胞外基質(zhì)MB生物蛋白及其制備試劑盒與方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202011460598.4
• 申請日: 2020-12-11
• 公開（公告）號: CN112538513B
• 公開（公告）日: 2022-12-06
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 肖鍔
• 申請（專利權(quán)）人: 湖南美柏生物醫(yī)藥有限公司
• 主分類號: C12P21/02
• 分類號: C12P21/02;C07K14/78;C07K14/47;C12N5/0775;A61L27/22;A61L27/24;A61L27/36
• 代理公司: 北京華沛德權(quán)律師事務(wù)所 11302
• 代理人: 修雪靜

本發(fā)明提供了一種細胞外基質(zhì)MB生物蛋白及其制備試劑盒與方法，所述蛋白包括10％～30％的一型膠原α1鏈、10％～20％一型膠原的α2鏈、10％～30％三型膠原α1鏈、10％～30％彈性蛋白、3％～15％的纖維黏連蛋白、3％～15％的核心蛋白聚糖和1％～8％層黏連蛋白；所述試劑盒包括0～20ng/mLbFGF；2～20ng/mLPDGF?bb；160ng/mLIGF～1；1～100ng/mLTGF?β1；1～30ng/mL地塞米松；0.5～1.5％ITS；30～100ug/mL卡拉膠、0.01～1mg/mL黃原膠和0.03～0.1mg/mL硫酸葡聚糖中至少一種。該方案能產(chǎn)生大量含膠原細胞外基質(zhì)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明實施例屬于細胞外基質(zhì)的制備技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種細胞外基質(zhì)MB生物蛋白及其制備試劑盒與方法。

背景技術(shù)

細胞外基質(zhì)是細胞生存的重要微環(huán)境，能夠調(diào)控細胞增殖、分化等一系列行為和功能。細胞外基質(zhì)主要由膠原、蛋白多糖和粘多糖等組成。一型膠原是皮膚、骨骼等組織細胞外基質(zhì)中的主要膠原蛋白類型，對細胞粘附、增殖、遷移、增殖分化具有非常重要的作用。在軟硬組織損傷修復(fù)過程中也發(fā)揮了不可或缺的作用，具有重要的醫(yī)學(xué)應(yīng)用價值。然而，到目前為止市場上運用的膠原多來自于動物，有過敏、組織排異等風(fēng)險。到目前為止尚未有成熟的人源一型膠原蛋白，尤其是利用人源間充質(zhì)干細胞作為生物反應(yīng)器大量生產(chǎn)細胞外基質(zhì)復(fù)合膠原蛋白等。

因此，如何開發(fā)能夠產(chǎn)生更多的總細胞外基質(zhì)MB生物蛋白的一種細胞外基質(zhì)MB生物蛋白及其制備試劑盒與方法，成為亟待解決的技術(shù)問題。

發(fā)明內(nèi)容

為了解決所述技術(shù)問題，本發(fā)明實施例提供了一種細胞外基質(zhì)MB生物蛋白及其制備試劑盒與方法，該方法能夠使間充質(zhì)干細胞產(chǎn)生8-10倍常規(guī)間充質(zhì)干細胞培養(yǎng)能夠產(chǎn)生的總細胞外基質(zhì)MB生物蛋白。

在本發(fā)明實施例的第一方面，提供了一種利用人間充質(zhì)干細胞生產(chǎn)細胞外基質(zhì)的試劑盒，所述試劑盒包括加藥誘導(dǎo)劑；所述試劑盒包括加藥誘導(dǎo)劑；所述加藥誘導(dǎo)劑包括在a-MEM或者DMEM中加入如下濃度的組分：

0～20ng/mL細胞生長因子bFGF；

2～20ng/mL血小板衍生因子PDGF-bb；

1～60ng/mL胰島素樣生長因子IGF-1；

1～100ng/mL轉(zhuǎn)化生長因子TGF-β1；

1～30ng/mL地塞米松；

0.5～1.5％細胞培養(yǎng)添加物ITS；

大分子刺激藥物：包括30～100ug/mL卡拉膠、0.01～1mg/mL黃原膠和0.03～0.1mg/mL硫酸葡聚糖中的至少一種。

進一步地，所述加藥誘導(dǎo)劑包括在a-MEM或者DMEM中加入如下濃度的組分：

1～3ng細胞生長因子bFGF；

3～12ng/mL血小板衍生因子PDGF-bb；

5～15ng/mL胰島素樣生長因子IGF-1；

3～10ng/mL轉(zhuǎn)化生長因子TGF-β1；

3～10ng/mL地塞米松，

0.5～1.5％細胞培養(yǎng)添加物ITS；

大分子刺激藥物：包括30～100ug/mL卡拉膠、0.01～1mg/mL黃原膠和0.03～0.1mg/mL硫酸葡聚糖中的至少一種。

在本發(fā)明實施例的第二方面，提供了一種利用人間充質(zhì)干細胞生產(chǎn)細胞外基質(zhì)MB生物蛋白的方法，所述方法包括：