[發明專利]同時檢測甲型流感病毒、乙型流感病毒及呼吸道合胞病毒的試劑盒

在審

• 申請號: 202011460072.6
• 申請日: 2020-12-11
• 公開（公告）號: CN112458212A
• 公開（公告）日: 2021-03-09
• 發明（設計）人: 李進福;高利飛;蘭定云;麥艷娜;李振紅;王瑋;付光宇
• 申請（專利權）人: 鄭州安圖生物工程股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/686;C12Q1/6851;C12N15/11;C12R1/93
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 溫可睿

本發明涉及PCR檢測技術領域，尤其涉及同時檢測甲型流感病毒、乙型流感病毒及呼吸道合胞病毒的試劑盒。本發明提供的引物探針組合中，包括針對甲型流感病毒/乙型流感病毒/呼吸道合胞病毒的特異性引物、探針。該引物和探針具有良好的特異性，結合real time PCR檢測方法，能夠實現對FluA/FluB/RSV的快速、準確、靈敏的鑒定。實驗表明，本發明的引物探針的檢測FluA/FluB/RSV的最低檢測限均為25copies/ml。并且，該試劑具有良好的穩定性，2～8℃保存3、6、9、12個月的試劑都可以實現對樣品的穩定檢測。

技術領域

本發明涉及PCR檢測技術領域，尤其涉及同時檢測甲型流感病毒、乙型流感病毒及呼吸道合胞病毒的試劑盒。

背景技術

呼吸道感染是人類最常見的疾病之一，造成呼吸道感染的主要原因是各種呼吸道病毒以及一些細菌、支原體、衣原體。其中，甲型流感病毒(influenza A virus)、乙型流感病毒(influenza B virus)、呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)為臨床較常見且重要的呼吸道病毒。呼吸道病毒引起的感染癥狀和流行性感冒特點相似，而引起的疫情及對社會造成的危害程度卻不相同，由于很難僅靠臨床癥狀確定真正的病原體，因此快速有效的鑒定呼吸道病原體種類，對于制定治療和用藥方案以及疫情防控均具有重要意義。

在現有技術中，分離培養是呼吸道病毒檢測的“金標準”，但該方法操作復雜，耗時長，不適合用于早期診斷。抗體檢測雖然操作簡便，但其靈敏度和特異性變化較大，容易出現假陽性和假陰性。以核酸為基礎的PCR(聚合酶鏈式反應)是一種用于特定核酸片段的擴增放大技術，該技術廣泛應用于基因檢測和病原體檢測，具有靈敏度高，特異性好，簡便，快捷等特點，對生物和醫學研究及臨床診斷具有重大意義。但現有技術中的熒光PCR檢測，因引物特異性等方面的原因，很難實現對甲型流感病毒、乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒的多重檢測。并且，現有技術中的檢測試劑保存條件非常嚴苛(為-20℃)，對運輸條件要求高，且凍融次數少(小于3次)，導致檢測成本高。且針對FluA/FluB/RSV鑒定的基因片段的選擇和引物探針的涉及存在不合理的現象，導致多數檢測試劑無法實現準確、快速、靈敏的檢測。

發明內容

有鑒于此，本發明要解決的技術問題在于提供同時檢測甲型流感病毒、乙型流感病毒及呼吸道合胞病毒的試劑盒，該試劑盒具有良好的靈敏性、特異性，且試劑的可以于2～8℃穩定性保存。

本發明提供的引物探針組合，其包括：

甲型流感病毒的正向引物，其核酸序列如SEQ ID NO:1所示；

甲型流感病毒的反向引物，其核酸序列如SEQ ID NO:2所示；

甲型流感病毒的探針，其核酸序列如SEQ ID NO:3所示；

乙型流感病毒的正向引物，其核酸序列如SEQ ID NO:4所示；

乙型流感病毒的反向引物，其核酸序列如SEQ ID NO:5所示；

乙型流感病毒的探針，其核酸序列如SEQ ID NO:6所示；

呼吸道合胞病毒的正向引物，其核酸序列如SEQ ID NO:7所示；

呼吸道合胞病毒的反向引物1，其核酸序列如SEQ ID NO:8所示；

呼吸道合胞病毒的反向引物2，其核酸序列如SEQ ID NO:9所示；

呼吸道合胞病毒的探針，其核酸序列如SEQ ID NO:10所示。