[發(fā)明專利]一種檢測(cè)松材線蟲的HDA等溫?cái)U(kuò)增試劑檢測(cè)方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011459471.0
• 申請(qǐng)日: 2020-12-11
• 公開（公告）號(hào): CN112458187A
• 公開（公告）日: 2021-03-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 紀(jì)國(guó)彬;程維金;張叔勇;羅治建
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 保綠豐（湖北）生物科技有限公司;武漢市林業(yè)工作站
• 主分類號(hào): C12Q1/6888
• 分類號(hào): C12Q1/6888;C12Q1/6844
• 代理公司: 深圳紫晴專利代理事務(wù)所(普通合伙) 44646
• 代理人: 付欽偉

1.一種檢測(cè)松材線蟲的試劑盒，其特征在于：該試劑盒由以下幾種試劑組成：

試劑A：松材線蟲組織裂解液，為2.5mmol/L DTT、1.125％Tween20、0.025％Gelatin緩沖液；

試劑B：HDA等溫?cái)U(kuò)增緩沖液，其中含有特定引物BxHDAF及BxHDAR；其序列為：

BxHDAF 5′-GGGTCGATGAAGAACGCAGTGAATTGC-3′；

BxHDAR 5′-CAAAGCCCAAGAGCGCAATATGCATTC-3′；

試劑C：HDA等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)酶液，其中含有解旋酶。

試劑D液：陽(yáng)性對(duì)照，為Bx陽(yáng)性DNA模板。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)松材線蟲試劑盒，其特征在于：所述試劑B中含有的松材線蟲等溫?cái)U(kuò)增緩沖液每管組成為：

5μ110×等溫?cái)U(kuò)增緩沖液，

2μ1100mM MgSO4，

4μ110mM NaCl，

3.5μ110mM dNTP Mixture，

1μ110pM BxHDAR,

1μ110pM BxHDAF。

3.根據(jù)據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)松材線蟲試劑盒，其特征在于：所述試劑D中HDA等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)酶混合液每管組成為

2U大腸桿菌解旋酶Ⅱ(UvrD)解旋酶；

Bst DNA Polymerase。