[發明專利]一株重組新城疫病毒毒株及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 202011459211.3
• 申請日: 2020-12-11
• 公開（公告）號: CN112501139B
• 公開（公告）日: 2023-03-21
• 發明（設計）人: 何金嬌;孫國鵬;鄧麗珠;吳云舟;徐鑫;李鵬;吳玉蘋;張萬方;邊瑞鵬;劉瑞涵
• 申請（專利權）人: 新鄉學院
• 主分類號: C12N7/01
• 分類號: C12N7/01;C12N15/85;C12N15/66;C12N15/62;A61K39/17;A61K39/12;A61P31/14;C12R1/93
• 代理公司: 北京慕達星云知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 11465
• 代理人: 王敏

1.一株重組新城疫病毒毒株rClone30-VP2-Fc，其特征在于，為將VP2蛋白的編碼基因和雞IgG的Fc通過GS linker連接插入到雞新城疫病毒毒株Clone30基因組的F和HN基因之間得到的重組病毒株；所述rClone30-VP2-Fc病毒的基因組序列為SEQ ID NO.2自5’末端第2703-20322位核苷酸序列。

2.權利要求1所述的一株重組新城疫病毒毒株rClone30-VP2-Fc的制備方法，其特征在于，具體步驟如下：

(1)合成VP2-Fc的雙鏈DNA分子，如SEQ ID NO.1所示；

(2)分別采用限制性內切酶Hpa I和Mlu I雙酶切步驟(1)的雙鏈DNA分子和pClone30質粒，回收，連接，得到重組質粒pClone30-VP2-Fc；所述重組質粒pClone30-VP2-Fc的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；

(3)將重組質粒pClone30-VP2-Fc以及相應的輔助質粒pBL-N、pBL-P和pBL-L共轉染BHK-21細胞，置于5％CO₂、37℃條件中靜置培養72h；

(4)取步驟(3)得到的轉染細胞，于-80℃反復凍融3次，離心收取細胞上清液，然后接種于9-11日齡SPF雞胚，37℃培養72h，收集雞胚尿囊液；

(5)取步驟(4)得到的雞胚尿囊液，接種于新的9-11日齡SPF雞胚，37℃培養72h，收集雞胚尿囊液；

(6)取步驟(5)得到的雞胚尿囊液，接種于新的9-11日齡SPF雞胚，37℃培養72h，收集雞胚尿囊液；

(7)將步驟(5)和步驟(6)得到的雞胚尿囊液混合，得到混合液，為rClone30-VP2-Fc病毒液。

3.權利要求1或2所述的一株重組新城疫病毒毒株rClone30-VP2-Fc在制備雞傳染性法氏囊病疫苗中的應用。