[發(fā)明專利]一種CSFV的IFA中和抗體檢測方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011459198.1
• 申請(qǐng)日: 2020-12-11
• 公開（公告）號(hào): CN112462060A
• 公開（公告）日: 2021-03-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李鵬;李紅;王選年;王利平;劉興友;劉長忠;劉明成;孫國鵬;岳鋒;張艷芳
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 新鄉(xiāng)學(xué)院
• 主分類號(hào): G01N33/569
• 分類號(hào): G01N33/569
• 代理公司: 北京慕達(dá)星云知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 11465
• 代理人: 崔自京

1.一種CSFV的IFA中和抗體檢測方法，其特征在于，具體步驟如下：

(1)將PK15細(xì)胞消化離心后制備成含1.0×10⁵cells/mL的細(xì)胞懸液，每孔100μL鋪到96孔板上，置于37℃5％CO₂培養(yǎng)箱中培養(yǎng)12h，待細(xì)胞完全貼壁，將等體積的CSFV病毒液和臨床血清37℃孵育1h，然后接種到96孔板內(nèi)的PK15細(xì)胞上，培養(yǎng)48h待細(xì)胞長滿后取出96孔板；同時(shí)設(shè)立正常接毒細(xì)胞對(duì)照孔；

(2)用預(yù)冷的無水乙醇固定，加入預(yù)冷的無水乙醇，每孔50μL，-20℃放置30min；棄去無水乙醇，PBST清洗，拍干；

(3)加入5％的脫脂奶粉進(jìn)行封閉，每孔200μL，37℃溫箱放置2h；PBST清洗，拍干；

(4)加入CSFV陽性抗體，用PBS按照1:400稀釋，每孔加入50μL，37℃溫箱放置1h；PBST清洗，拍干；

(5)加入羊抗豬IgG-FITC，用PBS按照1:100稀釋，每孔加入50μL，37℃溫箱放置1h，PBST清洗；最后每孔加入PBST 50μL，在倒置熒光顯微鏡進(jìn)行觀察。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種CSFV的IFA中和抗體檢測方法，其特征在于，所述CSFV病毒液的制備方法如下：將臨床采集的病料組織進(jìn)行研磨，按照1mg組織樣品加入1mL PBS溶解，反復(fù)凍融3次，取上清；12000rpm離心5min，用0.22μm濾器過濾，獲得CSFV病毒液。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種CSFV的IFA中和抗體檢測方法，其特征在于，所述臨床血清的制備方法如下：將采集的血液進(jìn)行離心，收集血清，用于后期臨床血清檢測。