[發明專利]一種組合物及其在檢測脂蛋白相關磷脂酶A2活性中的應用

有效

• 申請號: 202011458579.8
• 申請日: 2020-12-11
• 公開（公告）號: CN112575057B
• 公開（公告）日: 2021-07-30
• 發明（設計）人: 陳小茹;吳傳俠;吳向東;周博
• 申請（專利權）人: 深圳上泰生物工程有限公司
• 主分類號: C12Q1/44
• 分類號: C12Q1/44
• 代理公司: 深圳鼎合誠知識產權代理有限公司 44281
• 代理人: 周建軍;郭燕

一種組合物及其在檢測脂蛋白相關磷脂酶A2活性中的應用，該組合物含有底物、穩定劑，所述穩定劑選自冠醚類化合物、葡聚糖類化合物中的至少一種，所述底物可結合至脂蛋白相關磷脂酶A2，結合至所述脂蛋白相關磷脂酶A2的底物會發生分解。穩定劑的加入，使底物更加穩定，不易發生水解，有效控制試劑的空白吸光度，使得試劑的有效期達12個月以上。

技術領域

本發明涉及醫學檢驗技術領域。特別的，具體涉及一種組合物及其在檢測脂蛋白相關磷脂酶A2活性中的應用。

背景技術

研究顯示，中國等國家心血管病患病率處于持續上升階段。研究表明，動脈粥樣硬化是心腦血管疾病的病理基礎。

脂蛋白相關磷脂酶A2(簡稱Lp-PLA₂)能通過水解動脈內膜上氧化低密度脂蛋白(LDL)上的氧化磷脂而生成溶血磷脂酰膽堿(lysophosphatidylcholine，Lyso-PC)和氧化型游離脂肪酸(oxidized free fatty acids，ox-FA)，這兩種促炎介質能刺激黏附因子和細胞因子的產生，促進動脈粥樣硬化的發生和發展，導致血栓形成和心血管事件的發生。因此，Lp-PLA₂可作為心血管疾病中一種新的炎癥酶，是心血管疾病(CVD)、冠心病(CHD)、以及缺血性腦卒中的獨立危險因素。檢測人外周血Lp-PLA₂濃度能給臨床醫生提供預防和治療心腦血管疾病的新靶點，為臨床疾病的早期干預、臨床應用治療提供新思路和新方向。

臨床上主要通過濃度或者活性來檢測血液中脂蛋白相關磷脂酶A2。檢測濃度的方法存在定量準確性差、操作時間長、假陰性以及自動化程度低等缺點，而酶法是基于酶催化底物而建立的，操作簡便、抗干擾能力強、檢測迅速，便于推廣使用。

目前酶活的測定原理主要有兩種：一是使用PAF硫酯類為底物，Lp-PLA₂水解底物上sn-2位的硫酯基團釋放出游離硫醇，然后加入可以檢測硫醇的5，5-二硫(二硝苯甲酸)，在405nm處檢測吸光度的變化。此方法的優點是底物來源方便，可自己合成或購買，但該反應易受巰基基團的影響，準確度不高。二是以sn-2位帶有4-硝基苯酚基團的PAF類似物為底物，Lp-PLA₂水解底物后釋放出帶有4-硝基苯酚基團的物質，該物質不穩定，在水溶液中迅速降解生成對硝基苯酚，可通過檢測405nm波長下吸光度的變化測定Lp-PLA₂的活性。該方法受到外界的影響較少且操作簡單，可以上全自動生化分析儀。但該方法的底物PAF類似物為脂類，幾乎不溶于水，且樣本中血清酶等也能水解PAF類似物，使得測定結果不準確。用乙醇或者甘油雖可以促進底物形成水相，使得測定結果準確，但底物的穩定性大大降低，很容易發生降解，進而影響試劑的空白吸光度及試劑效期。目前市售的試劑盒多為Rl、R2a、R2b三試劑，使用前需將R2a和R2b按比例混合，混合后的試劑有效期為28天，使用不方便，配制后試劑穩定性差，有效期短。

發明內容

本發明提供一種組合物及其在檢測脂蛋白相關磷脂酶A2活性中的應用。

根據第一方面，一種實施例中提供一種組合物，該組合物含有底物、穩定劑，所述穩定劑選自冠醚類化合物、葡聚糖類化合物中的至少一種，所述底物可結合至脂蛋白相關磷脂酶A2，結合至所述脂蛋白相關磷脂酶A2的底物會發生分解。

根據第二方面，一種實施例中提供一種試劑組合，包括第一方面所述組合物。

根據第三方面，一種實施例中提供一種試劑盒，包括第一方面所述組合物或第二方面所述試劑組合。

根據第四方面，一種實施例中提供第一方面所述組合物，或第二方面所述試劑組合，或第三方面所述試劑盒在測定脂蛋白相關磷脂酶A2活性中的應用。

依據上述實施例的一種組合物及其在檢測脂蛋白相關磷脂酶A2活性中的應用，由于穩定劑的加入，使底物更加穩定，不易發生水解，有效控制試劑的空白吸光度，顯著延長試劑的有效期，在一些實施例中，穩定劑可使得試劑的有效期達12個月以上。