[發明專利]熒光相關光譜（FCS）在植物細胞核中的應用方法

在審

• 申請號: 202011457962.1
• 申請日: 2020-12-10
• 公開（公告）號: CN112697759A
• 公開（公告）日: 2021-04-23
• 發明（設計）人: 崔亞寧
• 申請（專利權）人: 北京林業大學
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64;G01N1/30
• 代理公司: 北京化育知識產權代理有限公司 11833
• 代理人: 涂琪順

本發明公開了熒光相關光譜(FCS)在植物細胞核中的應用方法，包括步驟一，熒光調制；步驟二，植物加工；步驟三，顯微成像；步驟四，細胞分析；步驟五，清洗處理；其中在上述步驟一中，人工根據植物細胞選擇合適的熒光基團原料；將選擇的熒光基團原料與水混合，并將其震蕩靜置存儲；該熒光相關光譜(FCS)在植物細胞核中的應用方法采用熒光基團原料使植物細胞核發出熒光，并采用電子顯微鏡繪制熒光相關光譜，方便快捷，有利于觀察植物細胞核，描述植物細胞核特征，分析植物細胞核生理生化過程，且該發明工藝簡單嚴謹，能夠代替其他較為昂貴的熒光相關光譜技術，效果顯著，材料便宜成本低廉，大大節約了成本，有利于用戶使用。

技術領域

本發明涉及植物細胞核技術領域，具體為熒光相關光譜(FCS)在植物細胞核中的應用方法。

背景技術

植物細胞是植物生命活動的結構與功能的基本單位，由原生質體和細胞壁兩部分組成；原生質體是細胞壁內一切物質的總稱，主要由細胞質和細胞核組成，在細胞質或細胞核中還有若干不同的細胞器，此外還有細胞液和后含物等，一般采用熒光相關光譜機械能分析，傳統熒光相關光譜在植物細胞核中的應用方法操作復雜，成本高，直接采用熒光基團原料使植物細胞核發出熒光，無法繪制熒光相關光譜，不利于觀察植物細胞核，無法描述植物細胞核特征，更無法分析植物細胞核生理生化過程；針對這些缺陷，設計熒光相關光譜(FCS)在植物細胞核中的應用方法是很有必要的。

發明內容

本發明的目的在于提供熒光相關光譜(FCS)在植物細胞核中的應用方法，以解決上述背景技術中提出的問題。

為了解決上述技術問題，本發明提供如下技術方案：熒光相關光譜(FCS)在植物細胞核中的應用方法，包括步驟一，熒光調制；步驟二，植物加工；步驟三，顯微成像；步驟四，細胞分析；步驟五，清洗處理；

其中在上述步驟一中，熒光調制包括以下步驟：

1)人工根據植物細胞選擇合適的熒光基團原料；

2)將選擇的熒光基團原料與水混合，并將其震蕩靜置存儲；

其中在上述步驟二中，植物加工包括以下步驟：

1)人工準備載玻片，并將載玻片中央滴入清水，隨后使用鑷子將植物表皮撕下，放入載玻片中央；

2)滴加熒光染料，將熒光染料滴在載玻片另一側，用吸水紙吸引熒光染料，使熒光染料浸潤植物表皮；

其中在上述步驟三中，顯微成像包括以下步驟：

1)人工將步驟一2)中混合物倒入探針中，通過探針將混合物滴加在植物表皮頂部，并蓋上蓋玻片；

2)將載玻片放入顯微鏡中，采用FCS對細胞質結構和細胞核進行探測；

3)記錄觀測的細胞質結構和細胞核，并通過顯微鏡拍照，繪制處細胞質結構和細胞核位置圖片；

其中在上述步驟四中，細胞分析包括以下步驟：

1)人工在載玻片區域投射激發光，細胞質結構和細胞核激發熒光基團，由時間分辨單光子探測儀記錄細胞質結構和細胞核熒光基團的光子發生事件，并計算出熒光相關光譜；

2)對比載玻液濃度，細胞質結構和細胞核結構移動的遷移率，測定細胞質結構和細胞核內動力學，繪制表格，存儲對比；

其中在上述步驟五中，熒光相關光譜測試完成后，取下載玻片，用鑷子取出植物表皮，清洗載玻片。

根據上述技術方案，所述步驟一2)中熒光基團原料與水混合比例為2∶1。

根據上述技術方案，所述步驟二1)中載玻片使用前需要使用紗布進行擦拭。

根據上述技術方案，所述步驟三1)中蓋玻片需要提前清洗。