[發明專利]一種對外界環境中可利用磷酸鹽濃度變化發生感應的分子元件及其突變分子元件和應用

有效

• 申請號: 202011457226.6
• 申請日: 2020-12-10
• 公開（公告）號: CN112481258B
• 公開（公告）日: 2021-08-24
• 發明（設計）人: 靳豪杰;付玉杰;孟冬;楊清;王立濤;張謖;牛麗麗
• 申請（專利權）人: 北京林業大學
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12N1/13;C12Q1/02;G01N21/64;C12R1/89
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 薛紅凡

1.一種對外界環境中可利用磷酸鹽濃度變化發生感應的分子元件，其特征在于，所述分子元件的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。

2.權利要求1所述分子元件在檢測外界環境中可利用磷酸鹽濃度中的應用。

3.一種用于有機膦降解的轉基因微生物在檢測外界環境中可利用磷酸鹽濃度中的應用，其特征在于，所述轉基因微生物包含權利要求1所述分子元件。

4.一種利用權利要求1所述分子元件檢測外界環境中可利用磷酸鹽濃度的方法，其特征在于，包括以下步驟：

1）將權利要求1所述分子元件與GFP熒光報告基因相連并分子克隆到載體中，得到重組載體；

2）將所述重組載體以三親結合方法轉入集胞藻中，得到重組集胞藻；

3）將所述重組集胞藻置于標準BG11培養基中培養36~40h后置于外部環境中，檢測熒光信號。

5.根據權利要求4所述方法，其特征在于，當所述外部環境中磷酸鹽濃度≥115 μM時所述分子元件被抑制，GFP綠色熒光蛋白不表達；在磷酸鹽濃度≤23 μM時所述分子元件被徹底激活，完全表達GFP綠色熒光蛋白；在磷酸鹽濃度為57.5 μM時，所述分子元件處于半開狀態，表達GFP綠色熒光蛋白。

6.一種對外界環境中可利用磷酸鹽濃度變化發生感應的突變分子元件，其特征在于，所述突變分子元件的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示。

7.權利要求6所述突變分子元件在精細指示環境中可利用磷酸鹽濃度或構建指示環境中可利用磷酸鹽濃度的重組細胞中的應用。

8.根據權利要求7所述應用，其特征在于，與權利要求1所述分子元件相比，所述突變分子元件對外部磷酸鹽濃度的變化會產生更為明顯的下游報告基因的熒光強度及敏感性。

9.一種用于指示環境中可利用磷酸鹽濃度的檢測試劑盒，其特征在于，包括含權利要求1所述分子元件或權利要求6所述突變分子元件的重組細胞。