[發明專利]一種依色格南的制備方法

在審

• 申請號: 202011457219.6
• 申請日: 2020-12-13
• 公開（公告）號: CN112500454A
• 公開（公告）日: 2021-03-16
• 發明（設計）人: 劉連喜;王莉;印輝;李靖;曹恩清;張凱倫
• 申請（專利權）人: 江蘇新瑞藥業有限公司
• 主分類號: C07K7/08
• 分類號: C07K7/08;C07K1/08;C07K1/06;C07K1/04;C07K1/113;C07K1/34;C07K1/20
• 代理公司: 北京兆君聯合知識產權代理事務所(普通合伙) 11333
• 代理人: 劉俊玲

1.一種依色格南的制備方法，該方法包括如下步驟：

(1)以Fmoc-Linker-氨基樹脂為起始原料，采用Fmoc/tBu固相合成方法，利用偶聯劑按照依色格南的氨基酸序列依次將Fmoc-氨基酸連接至溶脹后的氨基樹脂上，得到全保護十七肽的肽樹脂；

所述的連接至溶脹后的氨基樹脂上的Fmoc-氨基酸依次為：Fmoc-Arg(pbf)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Arg(pbf)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Arg(pbf)-OH、Fmoc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Gly-OH和Fmoc-Arg(pbf)-OH；即得到的所述全保護十七肽樹脂是H-Arg(pbf)-Gly-Gly-Leu-Cys(Trt)-Tyr(tBu)-Cys(Trt)-Arg(pbf)-Gly-Arg(pbf)-Phe-Cys(Trt)-Val-Cys(Trt)-Val-Gly-Arg(pbf)-氨基樹脂；

(2)將步驟(1)得到的肽樹脂以裂解液切割，同時脫去所有側鏈保護基，再以冰乙醚沉淀切割液而獲得依色格南線性粗肽；

(3)將步驟(2)得到的線性粗肽依色格南溶于水中得到多肽溶液，控制所述的多肽溶液中線性粗肽依色格南的濃度在0.5～5g/L范圍內，并調節所述多肽溶液的pH值至8-10；然后放置經自然空氣氧化，使線性粗肽依色格南在第5位與第14位、第7位與第12位間分別形成分子內二硫鍵，獲得依色格南粗品溶液；

(4)將步驟(3)得到的依色格南粗品溶液過濾、分離純化、轉鹽和冷凍干燥，獲得依色格南三氟醋酸鹽或依色格南醋酸鹽。

2.權利要求1所述的方法，其特征在于：步驟(1)所述的氨基樹脂選自以下幾種中的任意一種：Rink Amide-AM樹脂、Sieber Amide樹脂、PAL Amide樹脂、Knorr樹脂、Knorr-2-Chlorotrityl樹脂或Rink Amide-MBHA樹脂；優選的方案中，樹脂的取代值為0.1～1.5mmol/g，樹脂的顆粒大小為100～400目。

3.權利要求1所述的方法，其特征在于：步驟(1)所述的偶聯劑選自含有HOBt或HOAt的多種復合偶聯劑；優選的所述復偶聯劑含有DIC。

4.權利要求3所述的方法，其特征在于：所述的復合偶聯劑選自以下八種混合物中的任意一種：

X試劑、HATU與Y試劑按摩爾比為1:1:(1～5)混合；

X試劑、HBTU與Y試劑按摩爾比為1:1:(1～5)混合；

X試劑、HCTU與Y試劑按摩爾比為1:1:(1～5)混合；

X試劑與Y試劑DIC按摩爾比為1:(1～5)混合；

X試劑與EDC·HCl按摩爾比為1:(1～5)混合；

X試劑、PyAOP與Y試劑按摩爾比為1:1:(1～5)混合；

X試劑、PyBOP與Y試劑按摩爾比為1:1:(1～5)混合；

X試劑、TBTU與Y試劑按摩爾比為1:1:(1～5)混合；

其中，所述的X試劑為HOBt或HOAt，Y試劑為DIC。