[發明專利]一種木霉屬真菌tef1分子標記基因簡并引物組及其應用

在審

• 申請號: 202011456879.2
• 申請日: 2020-12-10
• 公開（公告）號: CN112375842A
• 公開（公告）日: 2021-02-19
• 發明（設計）人: 蔡楓;伊瑞娜·杜魯茲尼娜
• 申請（專利權）人: 奧世利華（蘇州）微生物科技研究院有限公司
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/686;C12Q1/04;C12N15/11
• 代理公司: 蘇州欣達共創專利代理事務所(普通合伙) 32405
• 代理人: 周升銘

1.一種木霉屬真菌tef1分子標記基因保守區域，其特征在于，包括SEQ ID NO.1和SEQID NO.2，所述SEQ ID NO.1為第四外顯子3’端，核苷酸序列為：5’-RYRACAGCCAYGTSGACTCCGGMAAGTCKACCACCGTRAGT-3’，所述SEQ ID NO.2為第六外顯子5’端：5’-AGACGCYCCCGGYCACCGTGAYTTCATCAAGAACATGATCACTGGTAC-3’；其中R＝A/G，Y＝C/T，S＝C/G，M＝A/C，K＝G/T。

2.一種簡并引物組，其特征在于，包括序列SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4，所述SEQ IDNO.3為正向引物，核苷酸序列為：5’-RYRACAGCCAYGTSGACTC-3’；所述SEQ ID NO.4為反向引物，核苷酸序列為：5’-GARGTACCAGTGATCATGTTCTTG-3’；其中，R＝A/G，Y＝C/T，S＝C/G；優選的，用于擴增權利要求1所述的木霉屬真菌tef1分子標記基因保守區域。

3.一種PCR反應體系，其特征在于，包括：模板DNA、DNA聚合酶、dNTPs、權利要求2所述的簡并引物組和去離子水。

4.根據權利要求3所述的PCR反應體系，其特征在于，所述簡并引物組引物終濃度為0.4μM。

5.根據權利要求3或4所述的PCR反應體系，其特征在于，所述模板DNA的終濃度為0.8-20ng/μl。

6.一種權利要求1所述的簡并引物組或權利要求3-5任一項所述的PCR反應體系在木霉屬真菌菌種鑒定領域的應用。

7.一種木霉屬真菌菌種鑒定方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1使用如權利要求2所述的簡并引物組為擴增引物或采用權利要求3-5任一項所述的PCR反應體系，對目標菌種的tef1分子標記基因有效片段進行PCR擴增；

S2將擴增產物進行凝膠電泳；

S3將經凝膠電泳確認后的產物測序，獲得tef1分子標記基因有效片段的核苷酸序列，經過比對后確定目標菌種的種屬。

8.根據權利要求7所述的木霉屬真菌菌種鑒定方法，其特征在于，所述PCR擴增過程中預變性溫度為94-95℃；退火溫度為55-58℃，延伸溫度為72℃。

9.一種木霉屬真菌菌種鑒定試劑盒，其特征在于，包括權利要求2所述的簡并引物組或權利要求3-5任一項所述的PCR反應體系。

10.一種權利要9所述木霉屬真菌菌種鑒定試劑盒的使用方法，其特征在于，包括權利要求7或8所述的木霉屬真菌菌種的鑒定方法。