[發(fā)明專利]一種曲氟尿苷與其異構(gòu)體的HPLC分離方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 202011456737.6 | 申請日： | 2020-12-10 |
| 公開（公告）號： | CN112362791B | 公開（公告）日： | 2023-06-06 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 徐昊;李泉妙;王淑娟;康威 | 申請（專利權(quán)）人： | 國藥一心制藥有限公司 |
| 主分類號： | G01N30/06 | 分類號： | G01N30/06;G01N30/74 |
| 代理公司： | 北京集佳知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11227 | 代理人： | 王洋 |
| 地址： | 130616 吉林*** | 國省代碼： | 吉林;22 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 曲氟尿苷 與其 異構(gòu)體 hplc 分離 方法 | ||
本發(fā)明提供了一種曲氟尿苷與其異構(gòu)體的HPLC分離方法，包括：A)將曲氟尿苷及其異構(gòu)體在衍生化試劑、溶劑和縛酸劑的存在下分別進(jìn)行衍生化，得到曲氟尿苷衍生化樣品和曲氟尿苷異構(gòu)體樣品；B)采用高效液相色譜對曲氟尿苷衍生化樣品和曲氟尿苷異構(gòu)體樣品進(jìn)行檢測；色譜參數(shù)為：色譜柱為C18柱；柱溫為35℃～45℃；檢測波長為238nm～242nm，流動相流速為0.8mL/min～1.2mL/min，所述流動相為梯度洗脫；流動相A為7.2g/L～8.4g/L的磷酸二氫鈉溶液；流動相B為乙腈。本發(fā)明通過對曲氟尿苷及其異構(gòu)體進(jìn)行類苯酰基衍生化，采用反相色譜柱，實現(xiàn)了曲氟尿苷及其異構(gòu)體的分離。
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明涉及藥物分析技術(shù)領(lǐng)域，尤其是涉及一種曲氟尿苷與其異構(gòu)體的HPLC分離方法。
背景技術(shù)
三氟胸苷作為一種癌癥治療藥物，目前主要用于結(jié)直腸癌的治療。經(jīng)對其結(jié)構(gòu)進(jìn)行逆合成分析，該化合物為由2-脫氧-D-核糖、尿嘧啶、三氟甲基三個重要結(jié)構(gòu)單元組成。因此，2-脫氧-D-核糖與尿嘧啶的縮合是制備曲氟尿苷的主要策略。曲氟尿苷是含有3個手性中心的多手性化合物，具體如式(I)結(jié)構(gòu)。因此，在原料藥質(zhì)量控制中，立體異構(gòu)體的控制就尤其關(guān)鍵。
詳細(xì)的文獻(xiàn)調(diào)研，確認(rèn)了上述分析。目前報道的曲氟尿苷的合成路線主要是該路線以5-三氟甲基尿嘧啶和2-脫氧-D-核糖為起始原料，分別經(jīng)硅基化保護(hù)和甲基化、對氯苯甲酰基化、氯代后經(jīng)縮合、脫保護(hù)共經(jīng)歷六步反應(yīng)制得曲氟尿苷，具體如式(II)所示。
結(jié)合曲氟尿苷結(jié)構(gòu)和其主要的合成路線進(jìn)行綜合分析可知，其3,4位的手性結(jié)構(gòu)可能來自呋喃糖結(jié)構(gòu)，其雜質(zhì)產(chǎn)生的概率較小。其主要的異構(gòu)體雜質(zhì)應(yīng)為在合成工藝中形成的曲氟尿苷呋喃糖環(huán)1位的手性異構(gòu)體。
因此，曲氟尿苷原料藥質(zhì)量控制應(yīng)著重關(guān)注該異構(gòu)體的含量。因此，開發(fā)一種檢測該異構(gòu)體的方法是非常必要的。
發(fā)明內(nèi)容
有鑒于此，本發(fā)明要解決的技術(shù)問題在于提供一種曲氟尿苷與其異構(gòu)體的HPLC分離方法，本發(fā)明方法分離度高，檢測結(jié)果準(zhǔn)確。
本發(fā)明提供了一種曲氟尿苷與其異構(gòu)體的HPLC分離方法，包括：
A)將曲氟尿苷及其異構(gòu)體在衍生化試劑、溶劑和縛酸劑的存在下分別進(jìn)行衍生化，得到曲氟尿苷衍生化樣品和曲氟尿苷異構(gòu)體樣品；
B)采用高效液相色譜對曲氟尿苷衍生化樣品和曲氟尿苷異構(gòu)體樣品進(jìn)行檢測；
色譜參數(shù)為：
色譜柱為C18柱；柱溫為35℃～45℃；檢測波長為238nm～242nm，流動相流速為0.8mL/min～1.2mL/min，所述流動相為梯度洗脫；
流動相A為7.2g/L～8.4g/L的磷酸二氫鈉溶液；流動相B為乙腈。
優(yōu)選的，所述曲氟尿苷異構(gòu)體是指曲氟尿苷呋喃糖環(huán)1位的手性異構(gòu)體。
優(yōu)選的，所述衍生化試劑為苯甲酰氯、苯甲酸酐、對甲基苯甲酰氯、對甲基苯甲酸酐、對氯苯甲酰氯、對氯苯甲酸酐、對硝基苯甲酰氯或?qū)ο趸郊姿狒械囊环N或幾種。
優(yōu)選的，所述溶劑為二氯甲烷、三氯甲烷或四氫呋喃中的一種或幾種；所述縛酸劑為三乙胺或吡啶。
優(yōu)選的，所述衍生化的溫度為30℃～50℃，衍生化的時間為2～50min。
優(yōu)選的，步驟A)所述衍生化后還包括加入1mol/L稀鹽酸猝滅，經(jīng)萃取后，濃縮，即得。
優(yōu)選的，所述色譜柱為Waters?Symmetry?C18，5μm，4.6×150mm或Inertsil?ODS-3，4.6×150mm?5μm；所述色譜柱溫度為40℃；所述檢測波長為240nm。
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