[發明專利]一種催化效率高的制備(-)γ-內酰胺的方法

有效

• 申請號: 202011449267.0
• 申請日: 2020-12-09
• 公開（公告）號: CN112481320B
• 公開（公告）日: 2022-07-05
• 發明（設計）人: 倪曄;周彤彤;許國超;韓瑞枝;周婕妤;董晉軍
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12P13/02;C12N9/86;C12P41/00;C12R1/19
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠知識產權代理有限公司 23211
• 代理人: 林娟

1.一種全細胞轉化制備(-)γ-內酰胺的方法，其特征在于，以重組大腸桿菌為細胞催化劑，在含有文斯內酯的反應體系中反應，所述重組大腸桿菌表達了Thermaerobacter marianensis DSM 12885來源的(+)γ-內酰胺酶，所述(+)γ-內酰胺酶的氨基酸序列如SEQID NO.2所示。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，編碼所述(+)γ-內酰胺酶的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

3.如權利要求2所述的方法，其特征在于，所述重組大腸桿菌以pET28a、pET32a、pET41a、pQE80L、pET20b或pBAD為表達載體。

4.如權利要求3所述的方法，其特征在于，所述重組大腸桿菌在反應體系中的細胞濃度為1~10g/L。

5.如權利要求4所述的方法，其特征在于，反應條件為：溫度30~80℃，pH 6~8。

6.如權利要求5所述的方法，其特征在于，所述文斯內酯的濃度為218 g/L。

7.一種酶法制備(-)γ-內酰胺的方法，其特征在于，應用重組大腸桿菌生產(+)γ-內酰胺酶，再將生產的(+)γ-內酰胺酶在含有文斯內酯的反應體系中進行反應，所述重組大腸桿菌表達了Thermaerobacter marianensis DSM 12885來源的(+)γ-內酰胺酶，所述(+)γ-內酰胺酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

8.如權利要求7所述的方法，其特征在于，將重組大腸桿菌接種至培養基中，培養至OD₆₀₀達0.5~0.7，添加IPTG ，在16~30℃誘導培養8~24 h后離心收集菌體，并將細胞破碎獲得粗酶液。

9.如權利要求7或8所述的方法，其特征在于，所述的文斯內酯的濃度為5 ~2000 mmol/L。

10.如權利要求9所述的方法，其特征在于，所述的(+)γ-內酰胺酶的用量為1~10 g/L。

11.如權利要求10所述的方法，其特征在于，反應條件為：pH 6~8，溫度為30~80℃。