[發明專利]一種提高紅掌轉化效率的方法

有效

• 申請號: 202011446651.5
• 申請日: 2020-12-11
• 公開（公告）號: CN112522301B
• 公開（公告）日: 2022-09-06
• 發明（設計）人: 劉會君;程曼;馬志;范士猛
• 申請（專利權）人: 山東和正生態農業開發有限公司
• 主分類號: C12N15/82
• 分類號: C12N15/82;C12N15/53;C12N15/65;A01H4/00;A01H5/00;A01H6/10
• 代理公司: 濟南千慧專利事務所(普通合伙企業) 37232
• 代理人: 趙長林

一種提高紅掌轉化效率的方法，包括通過菌液將外源基因導入紅掌的受體材料的過程，所述受體材料來自于帶腋芽莖段。本申請采用幼苗帶腋芽莖段作為受體材料，可快速獲得陽性植株，大大提高培育效率。

技術領域

本申請涉及一種提高紅掌轉化效率的方法。

背景技術

紅掌(Anthurium andraeanum)，又稱花燭，天南星科多年生常綠草本植物。莖節短，葉自基部生出，綠色，革質，全緣，長圓狀心形或卵心形。葉柄細長，佛焰苞平出，革質并有蠟質光澤，橙紅色或猩紅色，肉穗花序黃色，可常年開花不斷。原產于哥斯達黎加、哥倫比亞等熱帶雨林區。常附生在樹上，有時附生在巖石上或直接生長在地上，性喜溫暖、潮濕、半陰的環境，忌陽光直射。紅掌花葉俱美，花期長、為優質的切花材料。用紅色紅掌為主材，配上小菊、霞草、艷山姜、變葉木瓶插，有著濃厚的江南鄉惰。若以紅掌為主花，籃插，配以文心蘭、報歲蘭、百合、天門冬，是一份精美無比的節日禮物。紅掌可以吸收人體排出的廢氣(氨氣、丙酮)，也可以吸收裝修殘留的各種有害氣體(甲醛等)，同時可以保持空氣濕潤，避免人體的鼻粘膜干燥。雖然花燭有較好的觀賞價值，但花色較少，在我國花卉市場的推行具有一定制約：利用傳統的常規育種方式進行花色選育，具有周期長、變異不確定等問題；而利用基因工程方法對進行遺傳改良，具有育種目標明確、費用低、操作簡單、重復性好和育種周期短等優點。

農桿菌介導的遺傳轉化技術已廣泛用于新品種的獲得或進行種質改良的研究，但獲得轉基團植株與再生體系、農桿菌株類型和浸染濃度、共培養方法和時間等諸多因素有關，這些因素組成一個完整的遺傳轉化系統，任何一個因素的效率偏低，均會導致遺傳轉化效率的下降甚至無法獲得轉基因植株。

目前，采用紅掌愈傷(管華，孔周陽，談建中，趙川樂，李秀秀，沈成晨等，對農桿菌介導轉化法獲得的紅掌轉基因材料的抑菌處理方法，2014年第11期，154-156)、葉片和莖段(周永剛，紅掌遺傳轉化受體系統的建立I離體高效培養體系的建立，2009年增刊，184-188)作為外植體，通過組織培養獲得再生植株已獲成功，由于管華等人采用紅掌愈傷作為外植體的方法，是經過愈傷組織的間接器官再生方式獲得再生植株的方法，是普遍用于植物遺傳轉化的再生方法，但該方法進行遺傳轉化陽性率較低；而周永剛等人采用葉片和莖段做為外植體，是通過直接器官再生方式獲再生植株，使用該方法紅掌轉化陽性率較高。在前期，我們已利用常規的農桿菌介導遺傳轉化方法對紅掌愈傷進行了試驗，但轉化陽性率較低，農桿菌污染率較高。因此，需進一步對紅掌遺傳轉化方法進行優化，目的是建立一種紅掌高效遺傳轉化的技術，為紅掌遺傳改良特別是花色和品種的改良提供技術基礎。經文獻檢索，尚無紅掌莖段遺傳轉化的相關報道。

發明內容

為了解決上述問題，本申請提出了一種提高紅掌轉化效率的方法，包括通過菌液將外源基因導入紅掌的受體材料的過程，所述受體材料來自于帶腋芽莖段。本申請采用幼苗帶腋芽莖段作為受體材料，可快速獲得陽性植株，大大提高培育效率。

優選的，所述菌液按照如下方法制備得到：用帶GFP基因的植物表達載體pBI 121，通過酶切連接菊花Flavanone 3-hydroxylase基因，然后使用凍融法導入農桿菌E.coliDH5a，獲得帶植物表達載體pBI 121-GFP-Flavanone3-hydroxylase的農桿菌E.coli DH5a菌液。

優選的，所述受體材料按照如下方法得到：選擇20-25d的無菌紅掌幼苗，切取帶腋芽莖段預培養為受體材料；所述預培養的時間不少于2天。

優選的，包括如下步驟：受體材料準備；菌液制備；外植體浸染；外植體共培養；轉化外植體洗菌；陽性篩選及熒光檢測。