[發(fā)明專利]一種貓須草無菌短枝快速繁殖的方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 202011440403.X
• 申請日: 2020-12-08
• 公開（公告）號: CN112655553A
• 公開（公告）日: 2021-04-16
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李佳慧;朱鵬錦;葉維雁;龐新華;周全光;呂平;譚秦亮;程琴;宋奇琦;盧業(yè)飛;歐克緯;農(nóng)澤梅;唐毓瑋
• 申請（專利權(quán)）人: 廣西壯族自治區(qū)亞熱帶作物研究所（廣西亞熱帶農(nóng)產(chǎn)品加工研究所）
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00;A01G24/15;A01G24/12;A01G24/28;A01G31/00
• 代理公司: 青海省專利服務(wù)中心 63100
• 代理人: 周同永

1.一種貓須草無菌短枝快速繁殖的方法，其特征在于，具體包括如下步驟：

步驟一，貓須草預(yù)處理培育：

S1：選取健壯無病蟲害的貓須草，小心挖起，抖掉根部的土壤并用清水沖洗，在枝條離地面3～4cm處修剪及剪去老葉保留葉柄，將修剪好的枝條用濃度為0.4％的咪酰胺或者濃度為0.2％的代森錳鋅藥液浸泡消毒1～2h；

S2：浸泡后移栽到，裝有用50％水溶代森銨350倍液消毒過后的培育基質(zhì)的花盆內(nèi)，并移入可密閉塑料大棚中；

S3：移栽苗定植后，每隔7天交替使用濃度為0.4％的咪酰胺和濃度為0.2％的代森錳鋅的混合液，或者單用濃度為0.4％的咪酰胺，或者單用濃度為0.2％的代森錳鋅藥液噴灑苗植株、地面以及塑料大棚四周一次；當(dāng)貓須草頂部新抽出幼嫩芽段時，將其從基部剪斷，作為無菌短枝快速繁殖用的外植體；

步驟二，外植體的清潔：將通過貓須草預(yù)處理培育得到的外植體帶回實驗室，剪去葉片，清水沖洗一遍，剪成2～3cm帶有一對腋芽的莖段，用洗潔精溶液浸泡5分鐘，流水沖洗20min，控干水分后裝入滅菌后的空瓶中，放入超凈工作臺，備用；

步驟三，外植體的消毒：在超凈工作臺中，將外植體轉(zhuǎn)移至新的滅菌后的空瓶中，倒入75％酒精浸泡外植體10～20s，用滅菌水沖洗一次，用0.1％升汞溶液浸泡4～8min，期間不斷搖動，用滅菌水沖洗6～8次，用滅菌紙吸干后接種；

步驟四，初代培養(yǎng)：在超凈工作臺中將消毒好的外植體用接種刀切掉外部邊緣部分，用鑷子將帶有一對腋芽的無菌短枝莖段按極性接種于裝有初代培養(yǎng)基的接種盤中，于培養(yǎng)室中培養(yǎng)15～30天；即可長成2～5cm的組培苗；初代培養(yǎng)選用MS基本培養(yǎng)基附加6-BA 0.5～2.0mg/L、NAA0.1～1.0mg/L、蔗糖20～30g/L、瓊脂7g/L；調(diào)節(jié)pH至5.8～6.0；

步驟五，繼代培養(yǎng)：將步驟四中得到的初代培養(yǎng)組培苗再剪成帶有一對腋芽的無菌短枝莖段，按極性接種于裝有繼代培養(yǎng)基的接種盤中，于培養(yǎng)室中培養(yǎng)15～30天；即可長成2～5cm的組培苗；繼代培養(yǎng)基選用MS基本培養(yǎng)基附加TDZ 0.01～0.1mg/L、IBA0.1～1.0mg/L、蔗糖20～30g/L、瓊脂7g/L；調(diào)節(jié)pH至5.8～6.0；

步驟六，生根培養(yǎng)：將步驟五中的繼代培養(yǎng)組培苗從基部剪下，置于生根培養(yǎng)基中，于培養(yǎng)室中培養(yǎng)15～30天；即可根長度達4～6cm，根須為白色；生根培養(yǎng)基以1/2MS為基本培養(yǎng)基，附加NAA 0.5～2.0mg/L、IBA 0.5～2.0mg/L、活性炭2～3g/L，蔗糖20～30g/L、瓊脂7g/L；調(diào)節(jié)pH至5.8～6.0；

步驟七，組培苗練苗移栽：待生根培養(yǎng)基質(zhì)中的小苗長到3～5cm高，根條數(shù)達6～10條時，將其移到塑料大棚中，自然光下練苗7～10天；后將其從培養(yǎng)瓶中取出，洗凈其底部培養(yǎng)基，置于多菌靈溶液中浸泡5～7min，移栽入已消毒培育基質(zhì)中，長出貓須草新葉即表示移栽成活。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種貓須草無菌短枝快速繁殖的方法，其特征在于，所述步驟一中的S2所述的可密閉塑料大棚在移入前，用0.4％的咪酰胺和0.2％的代森錳鋅消毒地面和四周。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種貓須草無菌短枝快速繁殖的方法，其特征在于，步驟二中的S3中當(dāng)貓須草頂部新抽出幼嫩芽段生長至8～10cm時，于晴天下午兩點鐘將其從基部剪斷，作為無菌短枝快速繁殖用的外植體。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種貓須草無菌短枝快速繁殖的方法，其特征在于，所述無菌短枝莖段每瓶接種1～2個，每個無菌短枝莖段帶有一對腋芽。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種貓須草無菌短枝快速繁殖的方法，其特征在于，所述步驟四、步驟五和步驟六中培養(yǎng)條件，均為培養(yǎng)溫度為23～28℃，光照強度為2000～2500lx。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種貓須草無菌短枝快速繁殖的方法，其特征在于，所述步驟一和步驟七中的培育基質(zhì)由體積比為1：1：1的珍珠巖、細河沙和泥炭土組成，其消毒方式為：用50％水溶代森銨350倍液，按每平方米培育基質(zhì)用3公斤稀釋液均勻噴灑。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種貓須草無菌短枝快速繁殖的方法，其特征在于，所述75％酒精和0.1％升汞在接種前一天配置；所述無菌水、無菌紙、接種盤、空瓶、鑷子、接種刀在121℃下滅菌35min，所述培育基質(zhì)的滅菌在121℃下滅菌18min。