[發明專利]一種貓須草無菌短枝快速繁殖的方法

在審

• 申請號: 202011440403.X
• 申請日: 2020-12-08
• 公開（公告）號: CN112655553A
• 公開（公告）日: 2021-04-16
• 發明（設計）人: 李佳慧;朱鵬錦;葉維雁;龐新華;周全光;呂平;譚秦亮;程琴;宋奇琦;盧業飛;歐克緯;農澤梅;唐毓瑋
• 申請（專利權）人: 廣西壯族自治區亞熱帶作物研究所（廣西亞熱帶農產品加工研究所）
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00;A01G24/15;A01G24/12;A01G24/28;A01G31/00
• 代理公司: 青海省專利服務中心 63100
• 代理人: 周同永

本發明涉及植物組培快繁技術領域，具體涉及一種貓須草無菌短枝快速繁殖的方法，通過貓須草預處理培育、外植體的清潔、外植體的消毒、初代培養、繼代培養、生根培養和組培苗練苗移栽等步驟完成。本發明采用多種光譜性殺菌劑對培育貓須草外植體的基質、移栽苗及生長空間進行全方位的消毒處理，避免了外植體所攜帶的病菌等干擾物質對組織培養的影響。以貓須草預培養獲得的帶腋芽莖段為外植體材料，篩選出適合無菌短枝快速繁殖的外植體消毒方法以及不同培養階段的培養基配方，提高了貓須草快速繁殖的效率和產量。本發明技術具有周期短、成苗快、遺傳性狀穩定，培養過程簡單，種苗生長一致等特點，可用于貓須草的大規模工廠化生產滿足市場需求。

技術領域

本發明涉及植物組培快繁技術領域，具體涉及一種貓須草無菌短枝快速繁殖的方法。

背景技術

貓須草(Clerodendranthus spicatus.(Thunb.)C.Y.Wu)是唇形科腎茶屬多年生草本植物，莖直立，具四棱，花冠淺紫或白色，花、果期5～11月。貓須草廣泛分布于熱帶與亞熱帶地區，我國主要分布于廣東海南，廣西南部，云南南部，臺灣及福建地區；喜溫暖濕潤的氣候，常生于林下潮濕處，土質以疏松肥沃的砂質壤土為佳，平地、緩坡地均能種植，對光照要求不嚴，可在全光照下栽培，有一定蔭蔽條件生長更好。民間多用此草藥治療急慢性腎炎，膀胱炎，尿路結石，對風濕性關節炎也有良好的作用。現代研究顯示，貓須草具有利尿、排石、抗菌、消炎、健腎、改善慢性腎功能衰竭和提高免疫力等七種醫療保健作用。貓須草作為一種具有巨大開發前景的植物，由于其具有重要的藥理作用，市場需求日益擴大。然而，貓須草結果率低，種子壽命只有15d，發芽率僅為40％，野生藥材資源日趨枯竭，傳統生產繁殖方式難以滿足市場需求。采用植物組織培養快繁技術，提供貓須草大規模種植所需健康種苗已經成為急需解決的問題。

近年來國內已有關于貓須草組織培養的研究，但通常是通過愈傷組織發生或叢生芽發生途徑再生植株這一技術路線，對采用無菌短枝快繁技術進行貓須草離體快速繁殖的研究很少。無菌短枝快繁技術類似于微型扦插，指外植體攜帶的帶腋芽莖段，在人工培養基和合適的條件下進行離體培養，使其長出新的枝條，再將其剪成帶腋芽莖段，繼代再生根成苗的繁殖方法。無菌短枝快繁技術成苗快，不經過愈傷組織誘導階段，遺傳性狀穩定，培養過程簡單，移裁容易成活，因此可能更適合大規模工廠化生產。

發明內容

為了解決現有技術中存在的問題，本發明提供了一種貓須草無菌短枝快速繁殖的方法。

本發明一種貓須草無菌短枝快速繁殖的方法，具體包括如下步驟：

步驟一，貓須草預處理培育：

S1：選取健壯無病蟲害的貓須草，小心挖起，抖掉根部的土壤并用清水沖洗，在枝條離地面3～4cm處修剪及剪去老葉保留葉柄，將修剪好的枝條用濃度為0.4％的咪酰胺或者濃度為0.2％的代森錳鋅藥液浸泡消毒1～2h；

S2：浸泡后移栽到，裝有用50％水溶代森銨350倍液消毒過后的培育基質的花盆內，并移入可密閉塑料大棚中；

S3：移栽苗定植后，每隔7天交替使用濃度為0.4％的咪酰胺和濃度為0.2％的代森錳鋅的混合液，或者單用濃度為0.4％的咪酰胺，或者單用濃度為0.2％的代森錳鋅藥液噴灑苗植株、地面以及塑料大棚四周一次；當貓須草頂部新抽出幼嫩芽段時，將其從基部剪斷，作為無菌短枝快速繁殖用的外植體；

步驟二，外植體的清潔：將通過貓須草預處理培育得到的外植體帶回實驗室，剪去葉片，清水沖洗一遍，剪成2～3cm帶有一對腋芽的莖段，用洗潔精溶液浸泡5分鐘，流水沖洗20min，控干水分后裝入滅菌后的空瓶中，放入超凈工作臺，備用；

步驟三，外植體的消毒：在超凈工作臺中，將外植體轉移至新的滅菌后的空瓶中，倒入75％酒精浸泡外植體10～20s，用滅菌水沖洗一次，用0.1％升汞溶液浸泡4～8min，期間不斷搖動，用滅菌水沖洗6～8次，用滅菌紙吸干后接種；