[發明專利]一種基于表面增強拉曼技術檢測血清中5-羥色胺的方法

有效

• 申請號: 202011440264.0
• 申請日: 2020-12-07
• 公開（公告）號: CN112362637B
• 公開（公告）日: 2023-05-23
• 發明（設計）人: 范敏;盧玉棟;尹麗君;韓思睿;游瑞云
• 申請（專利權）人: 福建師范大學
• 主分類號: G01N21/65
• 分類號: G01N21/65
• 代理公司: 福州科揚專利事務所(普通合伙) 35001
• 代理人: 李曉芬

本發明開發了一種基于表面增強拉曼技術檢測血清中5?羥色胺的方法。其技術方案包括：1)利用種子介導法制備Au?NRs，2)制備Au@4?聯苯乙炔(EBP)@Au?NRs，3)利用蒸發誘導自組裝的方法制備Au@EBP@Au?NRs陣列，4)制備Au@4?巰基苯甲腈(MBN)@Ag?NPs。將N?乙酰?L?半胱氨酸(NLC)和二硫代雙琥珀酰亞胺丙酸酯(DSP)分別修飾Au@EBP@Au?NRs陣列和Au@MBN@Ag?NPs，利用這兩個分子捕獲5?HT，借助激光拉曼光譜儀收集數據圖譜，以Au@EBP@Au?NRs陣列和Au@MBN@Ag?NPs上位于靜默區的特征峰信號強度比值實現對血清中5?HT含量的超靈敏檢測，本方法使用范圍為5*10supgt;?8/supgt;M?10supgt;?3/supgt;M。

技術領域

本發明屬于檢測的技術領域，具體涉及一種基于表面增強拉曼技術檢測5-HT的方法。

背景技術

5-羥色胺(5-Hydroxytryptamine，5-HT)又名血清素，是生物系統中重要的單胺神經遞質。它廣泛分布于中樞神經系統，尤其是在大腦皮層和突觸中。5-HT作為重要的信號分子，參與許多生理功能的調節，如內分泌調節，食欲調節，肌肉收縮，睡眠和情緒等，并在胃腸道(GIT)中調節腸道運動。據報道，5-HT含量過低與抑郁癥、焦慮神經癥和炎癥綜合癥等疾病有關，5-HT含量過高可能導致致命的5-羥色胺綜合征。除此之外，類癌，特別是中腸類癌，容易產生并分泌大量的5-HT，這導致患者血液中5-HT含量高，并引起皮膚潮紅，腹瀉和呼吸問題。評估5-HT血藥水平以及5-羥吲哚乙酸(5-HT的代謝物)是診斷類癌綜合癥的主要實驗室檢查，這些結果表明5-HT作為多種疾病中生物標志物的潛在用途。

表面增強拉曼光譜(SERS)技術是一個具有單分子水平敏感性的生物分子選擇性檢測的強大平臺，通過將待測物分子吸附在粗糙的納米金屬材料表面，可將拉曼信號增強至10⁶～10¹⁵倍。與傳統的免疫分析方法相比，SERS具有一些獨特的優點，比如由于SERS具有尖銳的指紋特征峰，可在真實復雜的樣品系統中實現對目標分子進行高選擇性檢測，另外SERS具有良好的穩定性、方便性和重現性，可以對樣品的拉曼信號進行高度放大和定量。

專利Nafion功能化三維含氮石墨烯/MoS2糊電極的制備及同時檢測5-羥色胺和多巴胺(CN?105929000A)具體公開了一種Nafion功能化三維含氮石墨烯/MoS₂糊電極的制備方法，并用于同時檢測5-HT和多巴胺。雖該方法步驟簡單、操作方便，但是其線性范圍僅為0.5～15μM。

發明內容

為了解決上述問題，本發明的目的是提供一種基于重氮偶聯反應機理的表面增強拉曼技術檢測血清中色氨酸的方法。本方法利用Au@EBP@Au?NRs陣列作為表面增強拉曼基底，借助修飾在Au@EBP@Au?NRs陣列上的NLC和修飾在Au@MBN@Ag?NPs上的DSP共同捕獲5-HT，從而構成三明治結構，以EBP和MBN的靜默區特征峰強度的比值對5-HT進行定量檢測，大大提高了檢測靈敏度，同時該方法具有高度的特異性，對絲氨酸、酪氨酸、組氨酸、谷氨基酸、賴氨酸、半胱氨酸、色氨酸、犬尿氨酸、苯丙氨酸等都無明顯感應。適用的檢測范圍為5*10^-8～10^-3mol/L，遠遠超過人體血清中所含有的5-HT含量。

本發明目的是通過以下方案實現的：

1、Au?NRs的制備

1)金種子的合成：將25μl?0.01M?HAuCl₄溶液加入1mL?0.1M?CTAB溶液后攪拌幾秒后立刻注入600μl?0.01M?NaBH₄溶液，攪拌30min后，在30℃水浴下靜置2h。