[發明專利]一種基于表面增強拉曼技術檢測血清中5-羥色胺的方法

有效

• 申請號: 202011440264.0
• 申請日: 2020-12-07
• 公開（公告）號: CN112362637B
• 公開（公告）日: 2023-05-23
• 發明（設計）人: 范敏;盧玉棟;尹麗君;韓思睿;游瑞云
• 申請（專利權）人: 福建師范大學
• 主分類號: G01N21/65
• 分類號: G01N21/65
• 代理公司: 福州科揚專利事務所(普通合伙) 35001
• 代理人: 李曉芬

1.一種基于表面增強拉曼技術檢測血清中5-羥色胺的方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)Au?NRs制備：利用種子介導法得Au?NRs溶液；

2)Au@EBP@Au?NRs?制備：將20?μl的4-聯苯乙炔加入2?mL步驟1）制備的Au?NRs中攪拌2h后，離心重懸；隨后逐一加入8?mL0.02?M?十六烷基三甲基氯化銨、100μl1?mM?HAuCl₄、100μl?0.1?M?抗壞血酸，攪拌1?h得到Au@EBP@Au?NRs溶液；

3)Au@EBP@Au?NRs陣列制備：將經過食人魚溶液處理后的玻璃片分別放入濃度為20?%wt?巰丙基三乙氧基硅烷中浸泡24?h，以乙醇清洗數次后干燥；將Au@EBP@Au?NRs溶液濃縮至50倍后，取5?uL滴至處理后的玻璃板上，放入濕度為95%、溫度為30℃的環境中自然蒸發，得Au@EBP@AuNRs陣列；

4)Au@MBN@Ag?NPs?制備：在強烈攪拌條件下，將2?mL濃度為1?%wt的檸檬酸鈉加入100mL沸騰后的濃度為0.01?%wt的氯金酸水溶液中；當溶液再次沸騰后繼續加熱攪拌15分鐘，然后將得到的酒紅色?Au?NPs溶液；2?mL純化后的AuNPs加入20?uL濃度為0.1?mM的4-巰基苯甲腈，孵化1?h后離心去除多余的4-巰基苯甲腈，并重懸在蒸餾水中；最后，將AuNPs溶液和硝酸銀溶液以體積比為20：1加入濃度為1?mM的硝酸銀溶液加入320uL濃度為0.01?M的抗壞血酸溶液中，攪拌30?min，最終獲得橘紅色Au@MBN@Ag溶液；

5）以N-乙酰-L-半胱氨酸修飾Au@EBP@Au?NRs陣列，以二硫代雙琥珀酰亞胺丙酸酯修飾Au@MBN@Ag?NPs；將不同濃度的5-羥色胺孵育至以N-乙酰-L-半胱氨酸修飾后的Au@EBP@AuNRs陣列上，再以二硫代雙琥珀酰亞胺丙酸酯修飾的Au@MBN@AgNPs捕獲5-羥色胺，形成三明治結構；借助激光拉曼光譜儀收集數據圖譜得到工作曲線，以Au@EBP@Au?NRs陣列和Au@MBN@Ag?NPs上位于靜默區的特征峰信號強度比值實現對血清中5-羥色胺含量的超靈敏檢測。

2.?根據權利要求1所述的一種基于表面增強拉曼技術檢測血清中5-羥色胺的方法，其特征在于，所述Au?NRs溶液的制備方法如下：在50?℃下，將7?g十六烷基三甲基溴化銨和1.234?g油酸鈉加入250mL蒸餾水中，攪拌至溫度降至30?℃，逐一加入18?mL?4?mM?AgNO₃溶液、250?mL?1?mM?HAuCl₄溶液、2.1?mL?37?%wt?鹽酸、1.25mL?64?mM抗壞血酸溶液和0.8?mL金種子溶液，攪拌10?s后，在30?℃中靜置48?h，得Au?NRs溶液。

3.?根據權利要求1所述的一種基于表面增強拉曼技術檢測血清中5-羥色胺的方法，其特征在于，步驟5）中N-乙酰-L-半胱氨酸的濃度為10^-3M，修飾時間為12?h；二硫代雙琥珀酰亞胺丙酸酯的濃度為10^-3?M，修飾時間為2?h；5-羥色胺的孵育時間為12?h。

4.?根據權利要求2所述的一種基于表面增強拉曼技術檢測血清中5-羥色胺的方法，其特征在于，金種子溶液的制備方法如下：取?10?mM?HAuCl₄水溶液、10?mM硼氫化鈉溶液、0.1M?十六烷基三甲基溴化銨溶液以0.025：0.6：1（v/v/v），攪拌30?min后，30?℃水浴下靜置2h，得金種子溶液。

5.根據權利要求1所述的一種基于表面增強拉曼技術檢測血清中5-羥色胺的方法，其特征在于：步驟5)中的工作曲線為y=-0.16x+1.18，R²=0.9877。