[發明專利]新型溶菌酶熒光傳感器的制備方法及其應用

在審

• 申請號: 202011437519.8
• 申請日: 2020-12-07
• 公開（公告）號: CN112577937A
• 公開（公告）日: 2021-03-30
• 發明（設計）人: 李雅萍;陳欣然;張一沫;李紫燕;韓洪亮;張伊琳;武冰冰
• 申請（專利權）人: 首都師范大學
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64;C08F220/54;C08F222/38;C08F220/20;C08F220/06;C08F2/44;C08K3/04
• 代理公司: 北京冠榆知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 11666
• 代理人: 朱亞琦

1.新型溶菌酶熒光傳感器的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)碳量子點的制備及純化；

(2)溶菌酶分子印跡聚合物的制備。

2.根據權利要求1所述的新型溶菌酶熒光傳感器的制備方法，其特征在于，在步驟(1)中，包括如下步驟：

(1-1)在20mL的小燒杯中，準確稱取0.5g聚乙烯亞胺BPEI、檸檬酸0.1g CA，用10mL 80℃的蒸餾水充分溶解，用油浴鍋在180℃加熱小燒杯至得到淺黃色粘稠的凝膠，向其中加入1mL蒸餾水得到淡黃色的溶液，重復上述實驗操作，至得到橙黃色的凝膠；將制得的橙黃色凝膠溶于10mL去離子水中，冷卻至室溫；

(1-2)用0.01mol/L的HCl作為流動相，將產物過硅膠柱，收集兩個流出組分，保留第二組分，收集進行旋蒸濃縮，然后用10mL去離子水溶解，裝入截留分子量500Da透析袋透析至pH為中性，旋蒸濃縮后，定容為0.0250g/mL的碳量子點CQDs溶液，放入冰箱4℃保存以備用。

3.根據權利要求1所述的新型溶菌酶熒光傳感器的制備方法，其特征在于，在步驟(2)中：

(2-1)準備單體：準確稱取一定量的單體N-異丙基丙烯酰胺NIPAAM；

(2-2)將pH為7.4的PBS緩沖溶液、碳量子點CQDs和溶菌酶LYZ加入到單體中，超聲溶解；

(2-3)加入交聯劑N，N’-亞甲基雙丙烯酰胺MBA，隨后加入磁子，令反應物在圓底燒瓶中充分混合，充分攪拌；

(2-4)加入引發劑過硫酸銨APS和四甲基乙二胺TEMED，抽真空后，在氮氣保護下發生聚合反應，得到多孔水凝膠；

(2-5)將多孔水凝膠放入凍干機凍干，隨后用研缽研磨成粉末狀，獲得可以印跡溶菌酶LYZ的分子印跡聚合物MIP；

(2-6)將分子印跡聚合物MIP溶解于醋酸HAc和十二烷基硫酸鈉SDS的混合洗脫液中；

(2-7)分子印跡聚合物MIP與混合洗脫液，放入截留分子量15000Da的透析袋用洗脫液進行洗脫；每間隔24小時，取一定量的洗脫外液用紫外分光光度計進行紫外光譜檢測，直至紫外譜圖LYZ的蛋白質吸收峰值趨于穩定，即認為模板分子已被完全去除；然后將透析凝膠袋放入去離子水中進行透析，以透析掉醋酸和十二烷基硫酸鈉，最后將凝膠冷凍干燥，研磨。

4.根據權利要求3所述的新型溶菌酶熒光傳感器的制備方法，其特征在于，在步驟(2-1)中，還包括輔助單體，輔助單體為甲基丙烯酸羥乙酯HEMA和甲基丙烯酸MAA中一種或兩種的混合物。

5.根據權利要求3所述的新型溶菌酶熒光傳感器的制備方法，其特征在于，在步驟(2-1)中，所述單體N-異丙基丙烯酰胺NIPAAM的加入量為3.955mmol。

6.根據權利要求4所述的新型溶菌酶熒光傳感器的制備方法，其特征在于，所述單體N-異丙基丙烯酰胺NIPAAM與所述輔助單體的總物質的量為3.89mmol-4.02mmol，其中單體N-異丙基丙烯酰胺NIPAAM為3.560mmol，甲基丙烯酸羥乙酯HEMA為0.230mmol-0.460mmol，甲基丙烯酸MAA為0.165mmol-0.330mmol。