[發明專利]一種γ-谷氨酰轉肽酶檢測試劑盒及其檢測方法

有效

• 申請號: 202011436205.6
• 申請日: 2020-12-10
• 公開（公告）號: CN112608977B
• 公開（公告）日: 2022-05-10
• 發明（設計）人: 冷毅斌;王長樂;敖慧龍;王振平;陳冬琴
• 申請（專利權）人: 武漢伊萊瑞特生物科技股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/48
• 分類號: C12Q1/48
• 代理公司: 武漢世躍專利代理事務所(普通合伙) 42273
• 代理人: 倪婭

本發明公開了一種γ?谷氨酰轉肽酶檢測試劑盒及其檢測方法，所述檢測盒包括基質緩沖液、酶提取液、底物、標準品和溶解稀釋液，其中，基質緩沖液包括三(羥甲基)氨基甲烷和雙甘肽，酶提取液為由三(羥甲基)氨基甲烷和鹽酸制備的緩沖液，底物為L?γ?谷氨酰?4?硝基苯胺，標準品為對硝基苯胺，溶解稀釋液為酸性DMSO。該檢測試劑盒采用了一種既不影響γ?GT催化L?γ?谷氨酰?4?硝基苯胺的反應，又能有效溶解對硝基苯胺的溶劑體系，解決了現有技術中只能用純理論方式計算對硝基苯胺生成量的問題，可以更加準確、直接的確定酶活力，且成本低、誤差小。

技術領域

本發明涉及生物檢測技術領域，具體涉及一種γ-谷氨酰轉肽酶檢測試劑盒及其檢測方法。

背景技術

γ-谷氨酰轉肽酶(γ-GT)廣泛存在于人體各器官中，是γ-谷氨酰循環中的關鍵酶，催化GSH降解，具有參與調節組織中谷胱甘肽水平、氨基酸的吸收與排泄、以及肽鏈中自由氨基酸的酰化等作用。正常人血清γ-GT的活力很低，在急性肝炎、肝癌和梗阻性黃痘等患者的血清中，γ-GT活力顯著升高，因而γ-GT活力的測定對于肝膽系統疾病的診斷有一定意義，有助于肝癌的診斷。

市面上有售以L-γ-谷氨酰基-4-硝基苯胺(GPNA)為底物的γ-谷氨酰轉肽酶檢測試劑盒，生成的顯色物質為對硝基苯胺，檢測波長為405nm。基于該原理的商品化試劑盒中，測定的結果主要有兩種處理方式：

第一，直接以γ-谷氨酰轉肽酶為標準品，測定標準曲線，對實驗測試結果進行校正。此法的計算方式直接，但以酶作為標準品成本較高，且酶標準品在儲存、運輸及測定過程中容易部分失活，導致結果出現偏差，影響準確性。

第二種則可以通過測定一段時間內OD值的增加來計算對硝基苯胺的生成量，從而定義樣本中的γ-GT酶活。此法以對硝基苯胺作為標準品，化學性質穩定，在405nm處有特征吸收，再通過速率法排除本底干擾，能有效測定出樣本中的γ-谷氨酰轉肽酶活力，同時具備較好的穩定性和準確性。

但目前市售的改法測試盒中，均沒有設置對硝基苯胺標準孔。結果的計算或以對硝基苯胺的摩爾吸光系數進行純理論轉換，又或者直接給出對硝基苯胺的標準曲線進行計算。這樣的理論計算，導致無法對實驗條件所造成的系統誤差進行校正，往往使得計算結果偏離測定真值，缺乏科學性。

究其原因，是因為目前無法找到一種合適的溶劑體系，使其既不會影響γ-GT催化L-γ-谷氨酰-4-硝基苯胺的反應，又能溶解對硝基苯胺，制得較高濃度的對硝基苯胺標準品溶液，從而令標準孔和測定孔的反應體系完全一致，排除試劑體系本身的干擾。

發明內容

有鑒于此，本發明提供了一種γ-谷氨酰轉肽酶檢測試劑盒，具體采用了一種既不影響γ-GT催化L-γ-谷氨酰-4-硝基苯胺的反應，又能有效溶解對硝基苯胺的溶劑體系，解決了現有技術中只能用純理論方式計算對硝基苯胺生成量的問題。

為了實現上述目的，本發明具體采用以下技術方案：

一種γ-谷氨酰轉肽酶的檢測試劑盒，包括以下試劑：基質緩沖液、酶提取液、底物、標準品和溶解稀釋液；

所述基質緩沖液包括三(羥甲基)氨基甲烷和雙甘肽，pH為7.8-8.4；所述酶提取液為由三(羥甲基)氨基甲烷和鹽酸制備的緩沖液；所述底物為L-γ-谷氨酰-4-硝基苯胺，所述標準品為對硝基苯胺，所述溶解稀釋液為酸性二甲基亞砜(DMSO)。

優選的，在上述技術方案中，所述基質緩沖液中的三(羥甲基)氨基甲烷的濃度為0.1-0.2mol/L，所述雙甘肽的濃度為0.05-0.15mol/L。

優選的，在上述技術方案中，所述酶提取液中的三(羥甲基)氨基甲烷的濃度為0.08-0.2mol/L。

優選的，在上述技術方案中，所述底物的質量為10-20mg，經溶解稀釋液溶解后，底物溶液的濃度為10-20mmol/L。