[發明專利]一種基于ELISA法檢驗豬肺炎支原體滅活疫苗體外效力的方法

在審

• 申請號: 202011433678.0
• 申請日: 2020-12-10
• 公開（公告）號: CN112213484A
• 公開（公告）日: 2021-01-12
• 發明（設計）人: 徐慧敏;盧曉楠;于萍萍;王美君;湯波;韓昱鵬;劉飛;劉奇;張淵魁;王敏
• 申請（專利權）人: 北京科牧豐生物制藥有限公司;兆豐華生物科技（南京）有限公司;兆豐華生物科技（南京）有限公司北京生物醫藥科技中心;兆豐華生物科技（福州）有限公司
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/58;G01N33/543
• 代理公司: 北京金蓄專利代理有限公司 11544
• 代理人: 洪濤

本發明屬于動物用生物制品檢驗技術領域，具體涉及一種基于間接競爭抑制ELISA檢測方法檢驗豬肺炎支原體滅活疫苗（DJ166株）體外相對效力的方法。本發明所述基于間接競爭抑制ELISA方法檢測豬肺炎支原體滅活疫苗（DJ166株）體外相對效力的方法，使用豬肺炎支原體DJ?166株接種適宜培養基培養，收獲的培養物經濃縮純化后經硫柳汞滅活制備抗原及滅活參考疫苗，通過將待檢疫苗與參考疫苗進行間接競爭抑制ELISA抗原檢測即體外相對效力ELISA檢測。本發明所述檢測方法，操作簡單、耗時短，具有良好的靈敏性和特異性，檢測結果穩定性、特異性和重復性好，是一種方便、快捷、特異、靈敏符合發展趨勢的效力測定方法。

技術領域

本發明屬于動物用生物制品檢驗技術領域，具體涉及一種基于間接競爭抑制ELISA檢測方法檢驗豬肺炎支原體滅活疫苗（DJ166株）體外相對效力的方法。

背景技術

豬支原體肺炎（MPS）俗稱豬喘氣病，又稱豬地方流行性肺炎，是一種由豬肺炎支原體引起的慢性接觸性呼吸道傳染病。豬支原體肺炎臨床癥狀主要為咳嗦和氣喘，一般患豬死亡率不高，但嚴重降低飼料轉化率，長期生長發育不良，造成巨大的經濟損失。目前，免疫接種豬肺炎支原體疫苗是防控MPS的重要措施之一，疫苗接種可有效減少肺部損失、提高飼料轉化率、縮短出欄時間。

目前，市場上有多家國內外疫苗公司均在生產和銷售豬肺炎支原體滅活疫苗。目前，傳統的檢驗豬肺炎支原體滅活疫苗體外相對效力的方法為攻毒保護試驗，即豬只免疫疫苗后通過強毒攻擊，通過與對照組相比，以確定疫苗的保護效力。此方法雖然可以直觀的評價疫苗的體外效力，但是卻存在動物試驗歷時時間長，而且試驗期間需要進行攻毒，存在生物安全風險，并且會因動物的種屬、窩別、年齡、體重、性別、健康狀況、飼養環境及飼料營養等諸多因素，直接影響到檢測結果的準確性及可靠性，不可避免地影響到檢測的重復性；以及試驗成本較高，效力檢驗使用動物、操作人員、攻毒菌液制備、飼養環境等條件導致攻毒保護試驗批間差異較大的缺陷。更重要的是，此方法檢測及出結果周期長達2個月之久，不僅延長了新疫苗的研發周期也間接縮短了疫苗的有效期，增加了疫苗庫存壓力，導致嚴重影響了疫苗的生產及銷售。因此，開發新的對豬肺炎支原體滅活疫苗效力檢測的方法，使之滿足快速、靈敏、重復性好的要求，將有利于提高檢測結果的可靠性，進一步保證產品質量，具有積極的意義。

發明內容

為此，本發明所要解決的技術問題在于提供一種基于間接競爭抑制ELISA檢測方法檢驗豬肺炎支原體滅活疫苗（DJ166株）體外相對效力的方法，該檢測方法操作簡單、特異性好、敏感性高、耗時短的優勢，可以取代傳統的豬體內效力動物試驗，已解決受試動物所帶來的影響因素多、重復性差、檢定周期長達2個月的不利因素，同時也可以減少生產線疫苗庫存量多，延長疫苗的有效期，保證疫苗的品質，降低檢定成本及勞動強度，提高檢測效率，兩天完成疫苗的體外相對效力全部試驗及數據整理和判定結果，可實現高通量疫苗效力檢測；

本發明所要解決的第二個問題在于提供用于建立以上所述檢測方法的參考疫苗制備方法及長期穩定保存的條件；

本發明所要解決的第三個問題在于提供建立以上所述的檢測方法的競爭支原體包被抗原、陽性血清和陰性血清的制備方法；

本發明所要解決的第四個問題在于提供用于建立以上所述檢測方法的待檢疫苗和參考疫苗稀釋方法；

本發明所要解決的第五個問題在于提供用于建立以上所述檢測方法的全程孵育時間的確定方法；

本發明所要解決的第六個問題在于提供用于建立以上所述檢測方法的全程稀釋液的確定方法；

本發明所要解決的第七個問題在于提供用于建立以上所述檢測方法的檢測結果的計算和分析方法；

本發明所要解決的第八個問題在于提供用于建立以上所述檢測方法在制備豬肺炎支原體滅活疫苗（DJ166株）中的用途。