[發明專利]線粒體功能干預材料在制備改善線粒體功能的保健品或藥品中的應用及其篩選方法

在審

• 申請號: 202011433402.2
• 申請日: 2020-12-10
• 公開（公告）號: CN112451673A
• 公開（公告）日: 2021-03-09
• 發明（設計）人: 李言;王立;聶陳志鵬;賀瑞坤;張旭光
• 申請（專利權）人: 湯臣倍健股份有限公司
• 主分類號: A61K45/00
• 分類號: A61K45/00;A61K38/01;A61K31/706;A61P3/00;C12Q1/02;A23L33/13;A23L33/18;A23L33/105
• 代理公司: 廣州致信偉盛知識產權代理有限公司 44253
• 代理人: 彭玲

本發明公開了線粒體功能干預材料在制備改善線粒體功能的保健品或藥品中的應用及篩選方法，采用棕櫚酸構建線粒體損傷模型；通過LC?MS/MS法測定?；鈮A；運用Seahorse細胞外通量分析儀檢測呼吸功能；定量PCR檢測線粒體DNA含量；實時定量PCR檢測主要與線粒體相關基因的mRNA水平的表達；采用Western blot法檢測骨骼肌中線粒體相關基因與氧化磷酸化復合體蛋白質；采用試劑盒檢測MDA含量及NAD+/NADH含量；采用透射電鏡觀察細胞線粒體的超微結構并進行形態學分析。相比較于現有的評價篩選體系，本發明提供的評價篩選系統更為科學、精準、高效。

技術領域

本發明屬于保健品或藥品領域，具體涉及線粒體功能干預材料在制備改善線粒體功能的保健品或藥品中的應用及其篩選方法。

背景技術

線粒體是真核細胞的重要組成部分，一直以來線粒體都被認為是細胞內的能源工廠，負責為細胞提供必要能源，使其得以執行日常功能。而人體細胞所需的能量主要都是由線粒體提供的，值得注意的是但隨著年齡的增長，線粒體功能每況愈下。然而越來越多的研究發現，線粒體不止細胞能量站的功能，它們參與了各種細胞功能調控，與許多人類疾病存在著莫大的聯系，包括細胞信號傳導、代謝、自噬、衰老和腫瘤發生都與線粒體的質量和活性相關。因此如何提升線粒體的功能和健康，被越來越多的研究人員所關注。

另外，盡管目前市面上存在大量宣稱針對線粒體的營養補劑，但其中大多數補劑存在具體功效不明確，效果過分夸大，作用機制不清等問題。目前關于線粒體功能檢測的相關技術種類繁多，且手段各異，較為通用的方法有相關基因蛋白檢測技術，Seahorse線粒體代謝能力檢測技術，透射掃描電鏡觀測技術以及相關代謝產物鑒定技術。但關于線粒體相關營養補劑的功能測定存在檢測指標不統一，檢測技術落后，檢測手段單一以及檢測不全面等問題。這些問題造成了市面上相關產品品質參差不齊，真假產品魚龍混雜的現象。

發明內容

為解決上述技術問題，本發明的首要目的在于提供線粒體功能干預材料在制備改善線粒體功能的保健品或藥品中的應用。

本發明的另一目的在于提供一種線粒體功能干預材料的篩選方法，相比較于現有的評價篩選體系，本發明提供的篩選方法更為科學、精準、高效。

本發明是通過以下技術方案實現：

本發明提供線粒體功能干預材料在制備改善線粒體功能的保健品或藥品中的應用，所述線粒體功能干預材料為煙酰胺單核苷酸（NMN）、海參肽、西蘭花種子水提物、枸杞提取物、槲皮素、橘皮苷或積雪草提取物中一種或幾種的混合，優選為NMN或海參肽。

本發明采用棕櫚酸（PA）構建線粒體損傷模型，研究發現NMN、海參肽、西蘭花種子水提物、枸杞提取物、槲皮素、橘皮苷或積雪草提取物都能顯著逆轉由PA造成的?；鈮A的積累，特別是中長鏈酰基肉堿的含量，且對基礎耗氧量、ATP 生成和最大耗氧量都有顯著增加。PCR結果表明，NMN和海參肽處理后的C2C12細胞中，大部分線粒體相關基因發生顯著變化，尤其是PPARD、Sirt3、OPA1、HSP60和CPT1b，mRNA表達呈現上百倍地升高。NMN和海參肽還能提高C2C12細胞中Cytc-1的蛋白水平，呼吸鏈復合體I也有增加的趨勢。NMN和海參肽能降低由PA造成ROS過量以及MDA過表達，并激活SOD的表達，同時，NMN能顯著增加NAD+/NAD的比例。由線粒體形態學分析圖像顯示，PA處理會導致部分線粒體發生腫脹，體積變大，內部的嵴結構被破壞，使線粒體結構發生紊亂；而NMN和海參肽處理則能夠逆轉PA對線粒體的破壞，會使線粒體體積變小，數量變多，嵴結構恢復正常且清晰可見，線粒體形態趨于正常。

經上述研究表明，NMN、海參肽、西蘭花種子水提物、枸杞提取物、槲皮素、橘皮苷或積雪草提取物能夠顯著改善線粒體功能。本發明將有效量的NMN、海參肽、西蘭花種子水提物、枸杞提取物、槲皮素、橘皮苷或積雪草提取物作為活性成分加入藥學上或保健食品學上可接受的載體，按照本領域常規方法制成藥物、食品或營養補充劑等，用于治療或預防與線粒體功能有關的病癥。