[發明專利]一種SARS-CoV-2N蛋白IgA的間接ELISA檢測方法

在審

• 申請號: 202011426611.4
• 申請日: 2020-12-09
• 公開（公告）號: CN112881681A
• 公開（公告）日: 2021-06-01
• 發明（設計）人: 柳燕;任翠平;周暢;瞿明勝
• 申請（專利權）人: 安徽醫科大學
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/58;G01N33/68;G01N33/543
• 代理公司: 蘇州翔遠專利代理事務所(普通合伙) 32251
• 代理人: 王華

1.一種SARS-CoV-2N蛋白IgA的間接ELISA檢測方法，其特征在于：包括下列步驟：

步驟1：將采用pH值為9.6的碳酸鹽緩沖液稀釋的新冠病毒核衣殼蛋白加入酶標板，每個反應孔100μL，4℃過夜，次日用PBST緩沖液清洗酶標板反應孔3-5次，每次4-6分鐘；

步驟2：向酶標板的反應孔加300μL的質量分數為5%的脫脂奶粉溶液作為封閉液進行封閉，4℃孵育18小時；

步驟3：棄去酶標板的反應孔中液體，用PBST緩沖液清洗酶標板反應孔3-5次，每次4-6分鐘；然后向反應孔分別加待檢測樣品100 μl，同時設立空白，陽性和陰性對照，37℃濕盒孵育1.5h；所述待檢測樣品為待檢測的不同稀釋度的血清、痰液或咽拭子；

步驟4：棄去酶標板的反應孔中液體，用PBST緩沖液清洗酶標板反應孔3-5次，每次4-6分鐘；每個反應孔添加PBST稀釋的HRP-山羊抗人IgA 100 μl，37 ℃溫育1h；

步驟5：棄去酶標板的反應孔中液體，用PBST緩沖液清洗酶標板反應孔3-5次，每次4-6分鐘；酶標板的反應孔每孔添加TMB單組分顯色液100 μl，37℃避光顯色5 min，酶標板反應孔每孔加入ELISA終止液50 μl，震蕩混勻；

步驟6：采用終點法，檢測波長450nm，參比波長630nm，酶標儀檢測450nm吸光度值；當OD_450nm值大于或等于0.235，判定為為陽性，OD_450nm值小于0.235則判定為陰性。

2.根據權利要求1所述的SARS-CoV-2N蛋白IgA的間接ELISA檢測方法，其特征在于：步驟1中，采用pH值為9.6的碳酸鹽緩沖液將新冠病毒核衣殼蛋白稀釋至濃度為5μg/ml，然后加入酶標板的反應孔中。

3.根據權利要求1所述的SARS-CoV-2N蛋白IgA的間接ELISA檢測方法，其特征在于：步驟3中，如果待檢測樣品為血清，則待檢測血清與ELISA抗體稀釋液的體積比為1：200；如果待檢測樣品為咽拭子或痰液，則均為原液。

4.根據權利要求1所述的SARS-CoV-2N蛋白IgA的間接ELISA檢測方法，其特征在于：步驟4中，HRP-山羊抗人IgA與ELISA抗體稀釋液的體積比為1：100000。