[發明專利]一種用于缺血性心臟病基因靶向治療的載基因顯影微泡及其制備方法

在審

• 申請號: 202011423454.1
• 申請日: 2020-12-08
• 公開（公告）號: CN112546245A
• 公開（公告）日: 2021-03-26
• 發明（設計）人: 田海;孫露;陳巍;黃明莉
• 申請（專利權）人: 哈爾濱醫科大學
• 主分類號: A61K49/22
• 分類號: A61K49/22;A61K48/00;A61K38/48;A61K38/50;A61K41/00;A61P9/10
• 代理公司: 北京科龍寰宇知識產權代理有限責任公司 11139
• 代理人: 馬鑫

1.一種用于缺血性心臟病靶向治療的載基因顯影微泡，其特征在于，所述的載基因顯影微泡包括陽離子顯影微泡以及分散于顯影微泡外殼表面的治療基因質粒，其中，所述的顯影微泡具有正電性的脂質雙分子層外殼以及包裹在外殼內部的生物惰性氣體，所述的治療基因質粒包括含有基質金屬蛋白酶抑制因子-3(TIMP-3)和沉默信息調節因子3(SIRT3)基因的質粒。

2.如權利要求1所述的載基因顯影微泡，其特征在于，所述的生物惰性氣體為C3F8。

3.如權利要求1或2所述的載基因顯影微泡，其特征在于，所述的陽離子顯影微泡通過以下方法制備得到：

將二棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC)、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000(DSPE-PEG2000)、DC膽固醇(DC-Chol)按照質量比4-6:1-3:0.1-1的比例進行混合，再加入三氯甲烷使其充分溶解；旋轉蒸發儀減壓蒸發，去除有機溶劑形成脂膜；在脂膜中加入甘油與PBS混合液，42℃水浴30min-1h，取脂膜和甘油、PBS混懸液加入管形瓶中；冷卻后用C3F8置換管形瓶內空氣2次，機械震蕩，即得高濃度陽離子顯影微泡，經60Co伽馬射線輻射或紫外線消毒滅菌，正常放置4℃冰箱保存，-20℃冰箱可穩定保存1月。

4.如權利要求3所述的載基因顯影微泡，其特征在于，二棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC)、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000(DSPE-PEG2000)、DC膽固醇(DC-Chol)按照質量比5:2:0.5的比例進行混合。

5.如權利要求3所述的載基因顯影微泡，其特征在于，旋轉蒸發儀50℃減壓蒸發。

6.如權利要求3所述的載基因顯影微泡，其特征在于，甘油與PBS混合液中甘油與PBS的體積比為1:9。

7.如權利要求1所述的載基因顯影微泡，其特征在于，所述的載基因顯影微泡通過以下方法制備得到：

分別制備含有人SIRT3或TIMP-3基因的質粒，以真核表達載體pCDNA3.1做為骨架載體；先將制備好的陽離子顯影微泡高頻震蕩60S，按0.06ml/kg體重計算并獲取相應體積的陽離子顯影微泡，再按28.5μg/kg體重計算并獲取相應體積的含有人SIRT3或TIMP-3基因質粒，如超過微泡最大結合率，則按微泡最大結合率計算即100ul陽離子微泡與40μg質粒結合，與準備好的微泡溶液混合，加0.9％生理鹽水稀釋至50ml，室溫下孵育20min，制得含有人SIRT3或TIMP-3基因的載基因顯影微泡制劑。

8.權利要求1-7任一項所述的載基因顯影微泡在制備缺血性心臟病靶向治療的藥物制劑中的應用。

9.如權利要求8所述的應用，其特征在于，所述的治療所采用的手段為超聲波靶向微泡擊碎技術。