[發(fā)明專利]一種基于超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定茶葉和茶湯中茚蟲威7種降解產(chǎn)物的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011422611.7
• 申請(qǐng)日: 2020-12-08
• 公開（公告）號(hào): CN112433014B
• 公開（公告）日: 2022-04-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張新忠;鐘青;陳宗懋;羅逢健;黎洪霞
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院茶葉研究所
• 主分類號(hào): G01N30/02
• 分類號(hào): G01N30/02;G01N30/06;G01N30/16;G01N30/34;G01N30/60;G01N30/72
• 代理公司: 杭州浙科專利事務(wù)所(普通合伙) 33213
• 代理人: 沈淵琪

一種基于超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定茶葉和茶湯中茚蟲威7種降解產(chǎn)物的方法，屬于茶葉農(nóng)藥殘留檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明包括：1）樣品提取凈化：對(duì)鮮葉或茶葉樣品，乙腈/水提取，C₁₈與GCB分散固相萃取凈化，濃縮后甲醇/水定容；或1）對(duì)茶湯樣品PRP?SPE柱富集凈化淋洗，甲醇洗脫接收，濃縮后甲醇/水定容；2）采用C?2色譜柱分離進(jìn)行超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)茚蟲威7種降解產(chǎn)物；3）計(jì)算茚蟲威降解產(chǎn)物標(biāo)準(zhǔn)曲線和線性相關(guān)系數(shù)；4）計(jì)算添加回收率、相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差、方法的檢測(cè)限和定量限。本發(fā)明方法滿足殘留分析要求，能夠?yàn)椴桴r葉、茶葉和茶湯中茚蟲威7種降解產(chǎn)物的研究檢測(cè)提供分析方法。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于茶葉農(nóng)藥殘留檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種基于超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定茶葉和茶湯中茚蟲威7種降解產(chǎn)物的方法。

背景技術(shù)

我國(guó)是茶葉的起源地，也是世界第一茶葉生產(chǎn)國(guó)和消費(fèi)國(guó)。茶葉對(duì)于廣大茶區(qū)的經(jīng)濟(jì)發(fā)展、山區(qū)茶農(nóng)的脫貧致富具有重要意義。茶葉是一種綠色健康飲料，其品質(zhì)及質(zhì)量安全關(guān)系著茶產(chǎn)業(yè)的長(zhǎng)期可持續(xù)發(fā)展。茶葉生長(zhǎng)喜濕熱環(huán)境，病蟲害相對(duì)容易發(fā)生，而噴施化學(xué)農(nóng)藥是防治茶樹病蟲害最快、最有效的方法。茚蟲威結(jié)構(gòu)獨(dú)特新穎、蒸氣壓低(2.5*10^-5mPa,25℃)、水溶解度小(0.20mg/L,20℃)、殺蟲效果好且用量低，是其中一種對(duì)茶樹鱗翅目害蟲假眼小綠葉蟬等有很好防治效果，且對(duì)天敵安全的噁二嗪類手性結(jié)構(gòu)農(nóng)藥。茚蟲威是通過在昆蟲體內(nèi)代謝為一種N-去甲氧羰基代謝物(DCJW，IN-JT333)，從而不可逆地阻斷Na⁺通道，逐漸使目標(biāo)害蟲神經(jīng)麻痹，影響攝食等活動(dòng)直至死亡。通過前期研究，2013年我國(guó)對(duì)茚蟲威在茶葉中的最大殘留限量(MRL)規(guī)定為5mg/kg，并促成國(guó)際食品法典委員會(huì)CAC制定此MRL值，使歐盟的MRL值也從0.05mg/kg修訂為5mg/kg，在近年來不斷提倡的茶園水溶性農(nóng)藥使用替代中，茚蟲威作為有機(jī)磷類高毒農(nóng)藥、新煙堿類高水溶解度農(nóng)藥的替代品，用于茶園害蟲的防治應(yīng)用，越來越廣泛。

近年來，隨著科學(xué)家的認(rèn)識(shí)和科學(xué)研究的不斷深入，農(nóng)產(chǎn)品和食品中農(nóng)藥代謝降解產(chǎn)物越來越受到關(guān)注。國(guó)際農(nóng)藥殘留聯(lián)席會(huì)議JMPR的評(píng)估報(bào)告中將茚蟲威殘留物定義為茚蟲威-S體和茚蟲威-R體的總量，報(bào)告中同時(shí)給出了一些代謝降解產(chǎn)物，除IN-JT333外，還有羥基化代謝物、噁二嗪開環(huán)代謝物等。然而關(guān)于茚蟲威殘留研究，前期主要集中在其外消旋體的檢測(cè)方法，包括采用氣相色譜法、氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法、液相色譜法和液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法等；2007年以來，逐漸開始有越來越多的報(bào)道采用不同固定相制成的色譜柱對(duì)不同樣品基質(zhì)中的茚蟲威對(duì)映體進(jìn)行手性分析，如采用萬古霉素晶體代謝物柱、(S)-α-甲基苯基氨基甲酸修飾的直鏈淀粉柱、直鏈淀粉-三-(3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯)(ChiralpakAD-RH)柱和纖維素-三-(3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯)(Chiralcel OD-H)柱等，不同農(nóng)產(chǎn)品中茚蟲威手性對(duì)映體的降解也引起科學(xué)家重視，相關(guān)報(bào)道逐漸增多。

本申請(qǐng)人前期也通過研究建立了茶葉等基質(zhì)中茚蟲威對(duì)映體的殘留分析方法，并用于田間實(shí)際樣品分析中，發(fā)現(xiàn)茶鮮葉中茚蟲威對(duì)映體之間存在降解差異。但這些方法和研究均只關(guān)注茚蟲威母體，很少涉及到其降解產(chǎn)物的研究。因此，本發(fā)明針對(duì)茚蟲威7種降解產(chǎn)物，建立了鮮葉、綠茶、紅茶、綠茶茶湯和紅茶茶湯中的UPLC-MS/MS殘留分析方法，為以后研究茚蟲威對(duì)映體在茶葉生長(zhǎng)加工沖泡過程中的降解代謝及在其它農(nóng)產(chǎn)品中的代謝分析提供分析方法，保障質(zhì)量安全。

發(fā)明內(nèi)容

針對(duì)上述現(xiàn)有技術(shù)中存在的缺陷，本發(fā)明的目的在于設(shè)計(jì)提供一種基于超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定茶葉和茶湯中茚蟲威7種降解產(chǎn)物的方法。通過比較不同酸堿度的提取溶劑、不同SPE柱富集凈化、不同上樣體積以及不同溶劑清洗凈化的效果，建立了茶鮮葉、綠茶、紅茶、綠茶湯和紅茶湯中茚蟲威降解產(chǎn)物的殘留分析方法。

一種基于超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定茶葉和茶湯中茚蟲威7種降解產(chǎn)物的方法，其特征在于包括以下步驟：