[發明專利]一種基于超高效液相色譜串聯質譜法測定茶葉和茶湯中茚蟲威7種降解產物的方法

有效

• 申請號: 202011422611.7
• 申請日: 2020-12-08
• 公開（公告）號: CN112433014B
• 公開（公告）日: 2022-04-01
• 發明（設計）人: 張新忠;鐘青;陳宗懋;羅逢健;黎洪霞
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院茶葉研究所
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/16;G01N30/34;G01N30/60;G01N30/72
• 代理公司: 杭州浙科專利事務所(普通合伙) 33213
• 代理人: 沈淵琪

1.一種基于超高效液相色譜串聯質譜法測定茶葉和茶湯中茚蟲威7種降解產物的方法，其特征在于包括以下步驟：

1）樣品提取凈化：對鮮葉或茶葉樣品，采用乙腈/水提取，C₁₈與GCB分散固相萃取凈化，濃縮后甲醇/水定容；

或1）樣品提取凈化：對茶湯樣品采用PRP-SPE柱富集凈化淋洗，甲醇洗脫接收，濃縮后甲醇/水定容，所述PRP-SPE柱為Strata-X 33u PRP -SPE柱；

2）采用Lux?3 μm Cellulose-2色譜柱進行超高效液相色譜串聯質譜檢測茚蟲威7種降解產物，色譜條件中流動相A為0.1%甲酸甲醇，B為5mmol/L乙酸銨水溶液；梯度洗脫程序為：70%-80%A0-4.5min，80%-98%A 4.5-5.2min，保持98%A5.2-9.2min，98%-70%A9.2-9.3min，隨后保持70%A2.6min；

3）配制茚蟲威7種降解產物標準儲備液，分別用9/1 v/v甲醇/水稀釋成混合標準溶液20 mg/L，然后將步驟1）處理后的鮮葉、茶葉或茶湯基質用9/1 v/v甲醇/水分別配制成10、5.0、2.50、1.0、0.50、0.25、0.10、0.050、0.025和0.01 mg/L的標準溶液，對映單體濃度為一半，UPLC-MS/MS進樣分析，每個濃度測定3次，以濃度為橫坐標x，峰面積平均值為縱坐標y，得到茚蟲威降解產物標準曲線和線性相關系數；

4）計算添加回收率、相對標準偏差、方法的檢測限和定量限，滿足殘留分析要求；

上述茚蟲威7種降解產物的化學結構式為：

，，，，，和。

2.如權利要求1所述的一種基于超高效液相色譜串聯質譜法測定茶葉和茶湯中茚蟲威7種降解產物的方法，其特征在于所述1）中鮮葉或茶葉樣品具體提取凈化為：經磨碎后稱取5g鮮葉或2g茶葉，至離心管中加入5mL純凈水，充分渦旋混勻后靜置20min，再加入10mL乙腈，渦旋混勻后靜置2h，加入5gNaCl后均質，渦旋混勻震蕩5min后離心，吸取上層有機相溶液7mL加入裝有0.525 g C₁₈和0.0875 g GCB的10mL離心管中，渦旋震蕩凈化1min后離心，過膜吸取上清液5mL于50mL雞心瓶中，旋轉濃縮干后，加入1mL 9/1 v/v甲醇/水定容，超聲輔助溶解，過0.22μm濾膜至進樣瓶中，UPLC-MS/MS待測。

3.如權利要求1所述的一種基于超高效液相色譜串聯質譜法測定茶葉和茶湯中茚蟲威7種降解產物的方法，其特征在于所述1）中茶湯樣品具體提取凈化為：用5mL甲醇和5mL水依次預淋洗活化PRP-SPE柱，吸取100mL茶湯上樣至PRP-SPE柱上，待樣液過柱完畢后，加入5mL4/6 v/v甲醇/水清洗PRP-SPE柱，棄去流出的樣液和清洗液，緩慢氣流吹干PRP-SPE柱2min，再用20mL甲醇洗脫PRP-SPE柱內待測目標物，接受洗脫液至100mL雞心瓶中，旋轉蒸發濃縮干后，加入1mL9/1 v/v甲醇/水定容，超聲輔助溶解，過0.22μm濾膜至進樣瓶中，UPLC-MS/MS待測。

4.如權利要求1所述的一種基于超高效液相色譜串聯質譜法測定茶葉和茶湯中茚蟲威7種降解產物的方法，其特征在于所述步驟2）中色譜條件為：3μm×150mm×2mm Lux?3 μmCellulose-2色譜柱；柱溫40℃；進樣量5μL；流速0.3mL/min。

5.如權利要求1所述的一種基于超高效液相色譜串聯質譜法測定茶葉和茶湯中茚蟲威7種降解產物的方法，其特征在于所述步驟2）中質譜條件為：電噴霧電離正離子多反應檢測模式ESI⁺-MRM；電噴霧毛細管電壓3.5KV；離子源溫度150℃；脫溶劑氣N₂溫度350℃，流速750L/h；錐孔反吹氣N₂流速50L/h；碰撞氣Ar流速0.25mL/min；電子倍增器倍增電壓700V；二級母離子駐留時間0.04s。