[發明專利]一種基于差分阻抗顆粒計數的免疫分析方法

有效

• 申請號: 202011422402.2
• 申請日: 2020-12-08
• 公開（公告）號: CN112698024B
• 公開（公告）日: 2022-04-26
• 發明（設計）人: 陳翊平;周陽;王知龍
• 申請（專利權）人: 華中農業大學
• 主分類號: G01N33/543
• 分類號: G01N33/543;G01N33/546;G01N15/10;G01N15/02
• 代理公司: 武漢智嘉聯合知識產權代理事務所(普通合伙) 42231
• 代理人: 徐紹新

1.一種基于差分阻抗顆粒計數的免疫分析方法，其特征在于包括以下步驟：

1）以高分子絕緣微球為信號探針，將生物識別分子與高分子絕緣微球偶聯，然后將待測目標物與其對應的生物識別分子進行免疫反應，使高分子絕緣微球的粒徑和數量發生變化；

2）將反應液注入顆粒計數通道，同時向顆粒計數通道內高速注入緩沖液，基于流體力學原理形成層流，使反應液中的高分子絕緣微球穩定有序地通過顆粒計數通道；

3）在顆粒計數通道的兩端設置正、負電極，高分子絕緣微球通過時導致電極間的阻抗變化，進而導致電極間的電勢信號發生變化，收集電勢信號，經放大、濾波處理后對高分子絕緣微球的顆粒粒徑和數量進行分析，進而得到待測目標物的含量，

所述高分子絕緣微球的粒徑為1 μm或3 μm，高分子絕緣微球是聚苯乙烯微球或聚丁二烯微球或聚異戊二烯微球；所述顆粒計數通道的內徑為10-100 μm；

所述顆粒計數通道內，緩沖液的流速是反應液的5-7倍，所述反應液的流速為5-10 μL/min；

當待測目標物的基質成分簡單時，將待測目標物與其對應的生物識別分子進行均相免疫反應并將反應液直接注入顆粒計數通道，其中，當待測目標物為生物大分子時，所述生物識別分子為與待測目標物對應的捕獲抗體和檢測抗體；當待測目標物為農獸藥小分子時，所述生物識別分子為與待測目標物對應的抗體和完全抗原；

當待測目標物的基質成分復雜時，將與待測目標物對應的捕獲抗體和檢測抗體分別與納米磁顆粒和高分子絕緣微球偶聯，進行免疫反應并將反應液經磁分離后再注入顆粒計數通道。

2.如權利要求1所述基于差分阻抗顆粒計數的免疫分析方法，其特征在于：當所述信號探針的直徑為3 μm時，納米磁顆粒與信號探針的質量比為3:1；當所述信號探針的直徑為1μm時，納米磁顆粒與信號探針的質量比為2:1。

3.如權利要求1所述基于差分阻抗顆粒計數的免疫分析方法，其特征在于：所述免疫反應和顆粒計數均在微流控芯片上進行，所述微流控芯片上設有反應通道和緩沖液通道，所述反應通道的內徑為50-500 μm。

4.如權利要求1所述基于差分阻抗顆粒計數的免疫分析方法，其特征在于：所述反應通道呈S形。