[發(fā)明專利]一種基于差分阻抗顆粒計(jì)數(shù)的免疫分析方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011422402.2
• 申請(qǐng)日: 2020-12-08
• 公開（公告）號(hào): CN112698024B
• 公開（公告）日: 2022-04-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳翊平;周陽(yáng);王知龍
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N33/543
• 分類號(hào): G01N33/543;G01N33/546;G01N15/10;G01N15/02
• 代理公司: 武漢智嘉聯(lián)合知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 42231
• 代理人: 徐紹新

1.一種基于差分阻抗顆粒計(jì)數(shù)的免疫分析方法，其特征在于包括以下步驟：

1）以高分子絕緣微球?yàn)樾盘?hào)探針，將生物識(shí)別分子與高分子絕緣微球偶聯(lián)，然后將待測(cè)目標(biāo)物與其對(duì)應(yīng)的生物識(shí)別分子進(jìn)行免疫反應(yīng)，使高分子絕緣微球的粒徑和數(shù)量發(fā)生變化；

2）將反應(yīng)液注入顆粒計(jì)數(shù)通道，同時(shí)向顆粒計(jì)數(shù)通道內(nèi)高速注入緩沖液，基于流體力學(xué)原理形成層流，使反應(yīng)液中的高分子絕緣微球穩(wěn)定有序地通過(guò)顆粒計(jì)數(shù)通道；

3）在顆粒計(jì)數(shù)通道的兩端設(shè)置正、負(fù)電極，高分子絕緣微球通過(guò)時(shí)導(dǎo)致電極間的阻抗變化，進(jìn)而導(dǎo)致電極間的電勢(shì)信號(hào)發(fā)生變化，收集電勢(shì)信號(hào)，經(jīng)放大、濾波處理后對(duì)高分子絕緣微球的顆粒粒徑和數(shù)量進(jìn)行分析，進(jìn)而得到待測(cè)目標(biāo)物的含量，

所述高分子絕緣微球的粒徑為1 μm或3 μm，高分子絕緣微球是聚苯乙烯微球或聚丁二烯微球或聚異戊二烯微球；所述顆粒計(jì)數(shù)通道的內(nèi)徑為10-100 μm；

所述顆粒計(jì)數(shù)通道內(nèi)，緩沖液的流速是反應(yīng)液的5-7倍，所述反應(yīng)液的流速為5-10 μL/min；

當(dāng)待測(cè)目標(biāo)物的基質(zhì)成分簡(jiǎn)單時(shí)，將待測(cè)目標(biāo)物與其對(duì)應(yīng)的生物識(shí)別分子進(jìn)行均相免疫反應(yīng)并將反應(yīng)液直接注入顆粒計(jì)數(shù)通道，其中，當(dāng)待測(cè)目標(biāo)物為生物大分子時(shí)，所述生物識(shí)別分子為與待測(cè)目標(biāo)物對(duì)應(yīng)的捕獲抗體和檢測(cè)抗體；當(dāng)待測(cè)目標(biāo)物為農(nóng)獸藥小分子時(shí)，所述生物識(shí)別分子為與待測(cè)目標(biāo)物對(duì)應(yīng)的抗體和完全抗原；

當(dāng)待測(cè)目標(biāo)物的基質(zhì)成分復(fù)雜時(shí)，將與待測(cè)目標(biāo)物對(duì)應(yīng)的捕獲抗體和檢測(cè)抗體分別與納米磁顆粒和高分子絕緣微球偶聯(lián)，進(jìn)行免疫反應(yīng)并將反應(yīng)液經(jīng)磁分離后再注入顆粒計(jì)數(shù)通道。

2.如權(quán)利要求1所述基于差分阻抗顆粒計(jì)數(shù)的免疫分析方法，其特征在于：當(dāng)所述信號(hào)探針的直徑為3 μm時(shí)，納米磁顆粒與信號(hào)探針的質(zhì)量比為3:1；當(dāng)所述信號(hào)探針的直徑為1μm時(shí)，納米磁顆粒與信號(hào)探針的質(zhì)量比為2:1。

3.如權(quán)利要求1所述基于差分阻抗顆粒計(jì)數(shù)的免疫分析方法，其特征在于：所述免疫反應(yīng)和顆粒計(jì)數(shù)均在微流控芯片上進(jìn)行，所述微流控芯片上設(shè)有反應(yīng)通道和緩沖液通道，所述反應(yīng)通道的內(nèi)徑為50-500 μm。

4.如權(quán)利要求1所述基于差分阻抗顆粒計(jì)數(shù)的免疫分析方法，其特征在于：所述反應(yīng)通道呈S形。