[發明專利]毛果楊HDA909基因在提高植物抗真菌能力中的應用

有效

• 申請號: 202011409624.0
• 申請日: 2020-12-04
• 公開（公告）號: CN112430602B
• 公開（公告）日: 2022-05-13
• 發明（設計）人: 馬旭俊;李淑娟;程玉祥
• 申請（專利權）人: 東北林業大學
• 主分類號: C12N15/29
• 分類號: C12N15/29;C12N15/82;C12N15/66;C07K14/415;A01H5/12;A01H6/00
• 代理公司: 北京盛詢知識產權代理有限公司 11901
• 代理人: 陳巍

本發明公開了毛果楊HDA909基因在提高植物抗真菌能力中的應用，涉及基因工程技術領域。本發明根據毛果楊HDA909基因序列，構建毛果楊HDA909過表達載體，采用農桿菌介導法導入受體植物，使得轉基因植物中的HDA909基因過量表達，獲得抗真菌植物。利用鏈格孢菌侵染植物，發現轉基因植株的菌斑數量和菌斑面積顯著降低，所受鏈格孢菌侵染損傷的程度較輕。本發明證明了毛果楊HDA909基因的過量表達能夠提高植物抗真菌能力，為未來進一步創建抗真菌的轉基因植株提供了新的思路。

技術領域

本發明涉及基因工程技術領域，特別是涉及一種毛果楊HDA909基因在提高植物抗真菌能力中的應用。

背景技術

隨著社會經濟發展，環境污染日趨嚴重，原有的森林樹種將會遇到與自然選擇下有重大不同的環境脅迫壓力。為保障人類生存環境和生活質量不再劣化，人類必須學會協助林木去更好更快地適應所遇到的各種隨人類社會現代化而加劇和新出現的環境脅迫因素。由于林木生長周期長,遺傳雜合性高，利用常規育種手段往往難以滿足不同目的定向培育樹木新品種的要求。近年來生物技術的發展以及分子育種研究的興起，為利用基因工程手段改良林木、加速林木新品種的選育奠定了基礎。

病原菌侵染是造成植物生產力大面積損失的重要因素。鏈格孢菌有299種，它不僅是人類對花粉和哮喘病的過敏源，更是主要的植物病原體。鏈格孢菌的孢子在植物表面生長繁殖時會產生大量菌絲，破壞植物細胞組織，致使植物受到侵害。

發明內容

本發明的目的是提供一種毛果楊HDA909基因在提高植物抗真菌能力中的應用，以解決上述現有技術存在的問題。

為實現上述目的，本發明提供了如下方案：

本發明提供毛果楊HDA909基因在提高植物抗真菌能力中的應用，所述的毛果楊HDA909基因序列如SEQ ID NO.1所示，所述毛果楊HDA909基因編碼的氨基酸序列如SEQ IDNO.2所示。

本發明還提供一種抗真菌植物的創制方法，根據權利要求1所述的毛果楊HDA909基因序列，構建毛果楊HDA909過表達載體，采用農桿菌介導法導入受體植物，使得轉基因植物中的HDA909基因過量表達，獲得抗真菌能力。

優選的，所述的受體植物是毛果楊。

優選的，所述的真菌為鏈格孢菌。

優選的，毛果楊HDA909過表達載體的構建方法，包括以下步驟：

1)以野生型毛果楊的葉片cDNA為模板，HDA909-Primer-F和HDA909-Primer-R為引物，獲得毛果楊HDA909基因目的片段；

2)利用Plasminal Mini KitⅠ將所得毛果楊HDA909基因目的片段和pMD18-TVector載體連接，連接產物為pMD18-HDA909；連接產物轉化到大腸桿菌感受態細胞，得到pMD18-HDA909重組質粒；

3)用BamHⅠ和KpnⅠ分別對pMD18-HDA909重組質粒和pROKⅡ質粒進行雙酶切，雙酶切后得到的HDA909基因片段和pROKⅡ載體線性片段用Gel Extraction Kit進行回收，回收產物利用T4連接酶連接，得到、pROKⅡ-HDA909質粒，即為毛果楊HDA909過表達載體。

優選的，HDA909-Primer-F引物序列如SEQ ID NO.3所示，HDA909-Primer-R引物序列如SEQ ID NO.4所示。

本發明公開了以下技術效果：