[發明專利]評估細胞培養介質上清液中生物分子還原風險的方法

在審

• 申請號: 202011409447.6
• 申請日: 2020-12-04
• 公開（公告）號: CN114592030A
• 公開（公告）日: 2022-06-07
• 發明（設計）人: 孟如杰;崔以晴;李雨桐
• 申請（專利權）人: 無錫藥明生物技術股份有限公司;上海藥明生物技術有限公司
• 主分類號: C12Q1/00
• 分類號: C12Q1/00;G01N33/50;G01N33/68;C12Q3/00;C12P21/02
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司 31100
• 代理人: 錢文宇

1.一種評估細胞培養介質上清液中生物分子還原風險的方法，所述方法包括：

(1)確定生物分子擬閾值還原水平L_th；

(2)測定所述細胞培養介質上清液的還原水平L_d；和

(3)比較L_d與L_th以判斷還原風險的存在，其中，若L_d大于或等于L_th，則表示有還原風險。

2.如權利要求1所述的方法，其中，確定生物分子擬閾值還原水平L_th包括：

建立梯度稀釋還原水平；和，確定使所述生物分子發生還原的最低梯度稀釋還原水平和未使所述生物分子發生還原的最高梯度稀釋還原水平；

其中，使所述生物分子發生還原的最低梯度稀釋還原水平或未使所述生物分子發生還原的最高梯度稀釋還原水平被作為所述擬還原閾值水平L_th。

3.如權利要求2所述的方法，其中，建立梯度稀釋還原水平可包括：

收集細胞；

裂解細胞；

獲得細胞裂解上清液；和，

梯度稀釋細胞裂解上清液，建立不同梯度稀釋還原水平。

4.如權利要求3所述的方法，其中，確定使所述生物分子發生還原的最低梯度稀釋還原水平和未使所述生物分子發生還原的最高梯度稀釋還原水平包括：

測試各梯度稀釋細胞裂解上清液的還原水平；

測試生物分子在各梯度稀釋細胞裂解上清液中還原與否；和，

確定使所述生物分子發生還原的最低梯度稀釋還原水平和未使所述生物分子發生還原的最高梯度稀釋還原水平。

5.如權利要求1所述的方法，其中，還原水平由還原指示劑指示。

6.如權利要求5所述的方法，其中，所述還原指示劑包括選自下組的那些：還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸NADPH、二氯酚靛酚DCPIP、活細胞破碎率及其任意組合；具體地，所述還原指示劑包括選自下組的那些：細胞培養介質上清液中的NADPH含量、DCPIP在細胞培養介質上清液中的顯色程度、細胞培養介質中的活細胞破碎率，及其任意組合；具體地，還原水平可通過以下方式來確定：(a)測定細胞培養介質上清液中的NADPH含量；(b)測定DCPIP在細胞培養介質上清液中的顯色反應程度；(c)測定細胞培養介質中的活細胞破碎率；或(d)上述(a)-(c)的任意組合。

7.一種控制細胞培養介質或細胞培養介質上清液中生物分子還原的方法，所述方法包括：

(1)確定生物分子擬閾值還原水平L_th；

(2)測定所述細胞培養介質上清液的還原水平L_d；和

(3)比較L_d與L_th以判斷還原風險的存在，其中，若L_d大于或等于L_th，則表示有還原風險；和，

(4)在有還原風險時，向細胞培養介質或細胞培養介質上清液施用抗還原措施。

8.如權利要求7所述的方法，其中，所述防還原措施選自下組：通氣、降溫、添加弱氧化劑、添加過氧化氫、添加硫氧還蛋白還原酶抑制劑，及其任意組合。

9.選自下組的一種或多種物質：用于檢測還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸NADPH的試劑、二氯酚靛酚DCPIP、用于檢測活細胞破碎率的試劑，及其任意組合，在評估細胞培養介質上清液中生物分子還原風險中的用途。

10.選自下組的一種或多種物質：用于檢測NADPH的試劑、DCPIP、用于檢測活細胞破碎率的試劑，及其任意組合，在制造用于評估細胞培養介質上清液中生物分子還原風險的產品中的用途。