[發明專利]一種母乳中寡糖含量的定量檢測方法

在審

• 申請號: 202011404481.4
• 申請日: 2020-12-03
• 公開（公告）號: CN114594169A
• 公開（公告）日: 2022-06-07
• 發明（設計）人: 梁鑫淼;李佳齊;閆競宇;鄭義;郭志謀
• 申請（專利權）人: 中國科學院大連化學物理研究所
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/34;G01N30/86
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標代理有限公司 21002
• 代理人: 馬馳

1.一種母乳中寡糖含量的定量檢測方法，采用色譜質譜聯用，使用24種寡糖標準品，進行液相色譜分離，質譜檢測，以保留時間為橫坐標，提取離子對的響應數值為縱坐標，建立標準品的標準曲線，對前處理后的母乳中游離寡糖進行色譜質譜聯用分析，代入標準曲線，得到母乳中24種游離寡糖的絕對含量信息；

所述24種寡糖標準品包括：

3’SL(3’-Sialyllactose)、6’SL(6’-Sialyllatose)、LST-b(Lacto-Sialyl-tetraoseb)、LST-c((Lacto-sialyl-tetraose)、DSLNT(Disialyl-LNT)、3’SLNFP-II(3’-Sialyl-Lacto-N-fucopentaose II)、6’SLNFP-VI(6’-Sialyl-Lacto-N-fucopentaose II)、2’FL(2’-Fucosyllactose)、3-FL(3-Fucosyllactose)、LNT(Lacto-N-tetraose)、LNnT(Lacto-N-neotetraose)、DFL(Difucosyl-Lacto)、LNFP-I(Lacto-N-fucopentaose I)、LNFP-III(Lacto-N-fucopentaose III)、LNFP-II(Lacto-N-fucopentaose II)、LNnDFH-II(Lacto-N-neo-difucohexaose II)、LNDFH-II(Lacto-N-difucohexaose II)、LNDFH-I(Lacto-N-difucohexaose I)、LNnDFH-I(Lacto-N-neo-difucohexaose I)、MFLNnH(Monofucosyl-Lacto-N-neo-hexaose)、MFLNH-III(Monofucosyl-Lacto-N-hexaose III)、MFLNH-I(Monofucosyl-Lacto-N-hexaose I)、DFpLNnH(Difucosyl-para-Lacto-N-neo-hexaose)、DFLNH[a](Difucosyl-Lacto-N-hexaose)。

2.根據權利要求1所述的方法，其使用的色譜分離填料包括但不僅限于:硅膠或硅膠表面鍵合極性基團的填料中的一種或二種以上，所鍵合的極性基團有氨基酸、酰胺、氨基、羧基、糖基合兩性離子中的一種或幾種。

3.根據權利要求1所述的方法，使用的液相分離條件包括：

a)流動相包括但不僅限于水；以及有機溶劑中的乙腈，甲醇，乙醇，丙酮，異丙醇中的一種或幾種；

b)添加劑包括甲酸銨緩沖鹽，乙酸銨緩沖鹽，甲酸，乙酸，三氟乙酸中的一種或幾種，緩沖鹽于流動相中濃度為0-200mM；

c)色譜柱內徑為2.1-10mm；

d)流動相為水和/或緩沖鹽溶液、以及有機溶劑；水和/或緩沖鹽溶液與有機溶劑作為洗脫液的比例為5/95～95/5；

e)流速為0.1-2BV/min；

f)柱溫為15-60℃。