[發明專利]一種人工微粒皮的制備方法及應用

在審

• 申請號: 202011399517.4
• 申請日: 2020-12-03
• 公開（公告）號: CN112472870A
• 公開（公告）日: 2021-03-12
• 發明（設計）人: 詹日興;趙小紅;羅高興;郭熠城
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍陸軍軍醫大學第一附屬醫院
• 主分類號: A61L27/36
• 分類號: A61L27/36;A61L27/38;A61L27/60;A61L15/40;A61L15/46
• 代理公司: 重慶華科專利事務所 50123
• 代理人: 康海燕

本發明公開了一種人工微粒皮的制備方法，其包括如下步驟：S1，脫細胞真皮基質微粒的制備；S2，表皮干細胞分離培養；S3，脫細胞真皮基質微粒與表皮干細胞的結合；S31，將S1制得的脫細胞真皮基質微粒在溫度為4～8℃的條件下、采用Ⅳ型膠原溶液浸泡包被，復溫至室溫，得到脫細胞真皮基質微粒懸浮液；S32，將脫細胞真皮基質微粒懸浮液滴加到細胞培養板中，采用K?SFM或Epilife培養液重懸細胞培養板中的脫細胞真皮基質微粒；S33，取S2中培養對數期的表皮干細胞消化、收集，調整濃度為0.2～0.5×10⁶個細胞/ml，加入到細胞培養板中，培養制得人工微粒皮。其能夠實現真皮基質與表皮干細胞的融合，制得的人工微粒皮具有快速促進創面愈合、提高創面愈合質量的作用。

技術領域

本發明涉及組織工程生物材料領域，具體涉及人工微粒皮的制備方法及應用。

背景技術

重度燒傷創面修復一直是燒傷醫學研究的難點，皮源匱乏是其根本問題。目前使用的微粒皮移植、MEEK微型皮片移植及自異體皮鑲嵌移植等技術臨床應用可達到1：14(取皮面積1％，可擴增覆蓋14％創面)創面封閉的需要。但這種傳統“拆東墻補西墻”的治療策略需要犧牲大量正常皮膚，以及重度燒傷往往需要進行多次手術封閉創面，重癥監護治療時間長，生命風險高。此外，已有采用皮膚層纖維細胞、臍帶間充質干細胞、多能干細胞和脫細胞真皮基質混合培養后修復創面的研究，但這些研究結果都沒有解決臨床特重癥燒傷患者應用的需求。為此，避免犧牲正常皮膚同時提供足夠皮源的創面封閉方式是現代燒傷醫學的研究重點。

CN111407929A公開了一種新型人工皮膚及其制備方法。該新型人工皮膚制備方法具體如下：取新鮮動物離體皮膚，通過氫氧化鈉、DNA酶、胰蛋白酶、十二烷基硫酸鈉、過氧乙酸、PBS等一系列處理后獲得脫細胞真皮基質，超聲混合將氧化石墨烯與脫細胞真皮基質溶液混勻，再通過富集處理后得到一種新型人工皮膚。其在修復創面的過程中只能起到生物敷料的作用，不具有形成完整皮膚結構的功能。

發明內容

本發明的目的是提供一種人工微粒皮的制備方法及應用，其能夠實現真皮基質與表皮干細胞的融合，制得的人工微粒皮具有快速促進創面愈合、提高創面愈合質量的作用。

本發明所述的人工微粒皮的制備方法，其包括如下步驟：

S1，脫細胞真皮基質微粒的制備；

S11，取動物離體皮膚消化、分離，去表皮組織保留真皮組織；

S12，將真皮組織粉碎為微粒并加入EDTA-胰蛋白酶溶液，進行震蕩脫細胞處理，得到脫細胞真皮基質微粒；

S2，表皮干細胞分離培養；

S21，取術后皮膚消化、分離，去真皮組織保留表皮組織；

S22，將表皮組織粉碎、消化、過濾、離心，收集細胞；

S23，以K-SFM或Epilife培養液調整細胞濃度為(1～2)×10⁶個細胞/25cm²，接種于采用Ⅳ型膠原包被處理的培養瓶中，常規培養至60～70％細胞融合，采用胰蛋白酶消化后傳代培養，得到表皮干細胞；

S3，脫細胞真皮基質微粒與表皮干細胞的結合；

S31，將S1制得的脫細胞真皮基質微粒在溫度為4～8℃的條件下、采用Ⅳ型膠原溶液浸泡包被12～18h，復溫至室溫，得到濃度為0.01～0.05g/ml的脫細胞真皮基質微粒懸浮液；

S32，將脫細胞真皮基質微粒懸浮液滴加到細胞培養板中，采用K-SFM或Epilife培養液重懸細胞培養板中的脫細胞真皮基質微粒；