[發明專利]一種利用多重DPO-RT-PCR檢測南方菜豆花葉病毒及煙草環斑病毒的方法有效
| 申請號： | 202011397569.8 | 申請日： | 2020-12-04 |
| 公開（公告）號： | CN112280905B | 公開（公告）日： | 2023-08-01 |
| 發明（設計）人： | 袁俊杰;龍陽;劉芳;李冠斯;魏霜;馬新華;盧乃會;楊卓瑜;陳文 | 申請（專利權）人： | 湛江海關技術中心 |
| 主分類號： | C12Q1/70 | 分類號： | C12Q1/70;C12Q1/686;C12R1/94 |
| 代理公司： | 廣州三環專利商標代理有限公司 44202 | 代理人： | 黃華蓮;郝傳鑫 |
| 地址： | 524000 廣東*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 利用 多重 dpo rt pcr 檢測 南方 菜豆 花葉 病毒 煙草 環斑 方法 | ||
1.一種利用多重DPO-RT-PCR檢測南方菜豆花葉病毒和煙草環斑病毒的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括DPO-PCR引物對，所述DPO-PCR引物對的序列如下：
SBMV-DPOf：GTAGTGGTGCGTGTGCCAAIIIIIGTGTGGTCCAA；
SBMV-DPOr：CAAGGGCCTTGACCCTGCCGCIIIIIGGTAGTTTAAAG；
和
TRSV-DPOf：GTTACGTTGTTCTTTTACTCTCIIIIIATTTTAATTG；
TRSV-DPOr：ATACCGAACAACTTCATGTTCAGTIIIIITTAAAACGTCCAC；
其中，“I”表示次黃嘌呤。
2.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述DPO-PCR引物對在體系中的濃度為0.1~0.6μmol/L。
3.根據權利要求2所述的試劑盒，其特征在于，所述DPO-PCR引物對在體系中的濃度為0.2μmol/L。
4.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，還包括陽性標準品、陰性對照品、PCR預混液和無核酸酶水。
5.權利要求1所述的試劑盒在檢測南方菜豆花葉病毒和/或煙草環斑病毒中的應用。
6.根據權利要求5所述的應用，其特征在于，所述檢測過程中退火溫度為45~65℃。
7.根據權利要求5所述的應用，其特征在于，所述檢測反應條件為42℃30?min；95℃3min；94℃30?s，60℃45?s，72℃1?min，35個循環；72℃5?min。
8.根據權利要求5所述的應用，其特征在于，所述檢測包括將PCR擴增產物經2%瓊脂糖凝膠電泳后在凝膠成像系統中成像分析的步驟。
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