[發明專利]基于SNP分子標記鑒定馬蘇金槍魚的引物、方法和試劑盒

有效

• 申請號: 202011395840.4
• 申請日: 2020-12-03
• 公開（公告）號: CN112592982B
• 公開（公告）日: 2022-04-26
• 發明（設計）人: 王聯珠;郭瑩瑩;姚琳;江艷華;曲夢;李娜;李風鈴;譚志軍;盧立娜;柳淑芳
• 申請（專利權）人: 中國水產科學研究院黃海水產研究所
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 北京智繪未來專利代理事務所(普通合伙) 11689
• 代理人: 郭紅燕

1.一種基于SNP分子標記鑒定馬蘇金槍魚的成套引物，其特征在于：

所述成套引物包括基于所述馬蘇金槍魚的物種特異性SNP分子標記而設計的一對PCR擴增引物和一條探針，

所述SNP分子標記包括位于SEQ ID No.1所示序列中第255位的C堿基，

所述一對擴增引物中的上游引物的序列是5’-CCACAACCTCTGAGTCTGAACCT-3’，下游引物的序列是5’-GCAAAGGCTGATAGTAAACAACAAAT-3’，

所述探針的序列是5’-TTTCATTCTGCCACTGTG-3’，所述探針的5’端標記有熒光報告基團6-FAM，3’端標記有熒光淬滅基團MGB。

2.一種基于SNP分子標記鑒定馬蘇金槍魚的成套引物，其特征在于：

所述成套引物包括基于所述馬蘇金槍魚的物種特異性SNP分子標記而設計的一對PCR擴增引物和一條探針，

所述SNP分子標記包括位于SEQ ID No.1所示序列中第255位的C堿基，

所述一對PCR擴增引物中的上游引物的序列是5’-CCACAACCTCTGAGTCTGAACCT-3’，下游引物的序列是5’-GCAAAGGCTGATAGTAAACAACAAAT-3’，

所述探針是循環探針，其序列是5’-cattctg(C)ca-3’，所述循環探針的5’端標記有熒光報告基團6-FAM，3’端標記有熒光淬滅基團Eclipse，其中所述探針序列中的小寫英文字母代表DNA堿基，括號標注的大寫英文字母代表RNA堿基。

3.一種基于SNP分子標記鑒定馬蘇金槍魚的方法，其特征在于：

所述SNP分子標記包括位于SEQ ID No.1所示序列中第255位的C堿基，

所述方法包括以下步驟：

(I)基于所述SNP分子標記設計一對PCR擴增引物和一條探針；

(II)從待鑒定對象的肌肉組織中提取DNA；

(III)利用所述一對PCR擴增引物和所述探針，以步驟(II)中所提取的DNA為模板進行實時熒光PCR反應，其中，所述一對PCR擴增引物中的上游引物的序列是5’-CCACAACCTCTGAGTCTGAACCT-3’，下游引物的序列是5’-GCAAAGGCTGATAGTAAACAACAAAT-3’，所述探針的序列是5’-TTTCATTCTGCCACTGTG-3’，所述探針的5’端標記有熒光報告基團6-FAM，3’端標記有熒光淬滅基團MGB，

在步驟(III)中，利用所述一對PCR擴增引物和所述探針進行實時熒光PCR反應。

4.一種基于SNP分子標記鑒定馬蘇金槍魚的方法，其特征在于：

所述SNP分子標記包括位于SEQ ID No.1所示序列中第255位的C堿基，

所述方法包括以下步驟：

(I)基于所述SNP分子標記設計一對PCR擴增引物和一條探針；

(II)從待鑒定對象的肌肉組織中提取DNA；

(III)利用所述一對PCR擴增引物和所述探針，以步驟(II)中所提取的DNA為模板進行實時熒光PCR反應，

所述一對PCR擴增引物中的上游引物的序列是5’-CCACAACCTCTGAGTCTGAACCT-3’，下游引物的序列是5’-GCAAAGGCTGATAGTAAACAACAAAT-3’，所述探針是循環探針，其序列為5’-cattctg(C)ca-3’，5’端標記有熒光報告基團6-FAM，3’端標記有熒光淬滅基團Eclipse，其中所述探針序列中的小寫英文字母代表DNA堿基，括號標注的大寫英文字母代表RNA堿基，

在步驟(III)中，利用所述一對PCR擴增引物和所述循環探針進行實時熒光PCR反應。