[發(fā)明專利]煙臺黑豬SLA-2基因真核表達(dá)細(xì)胞系的構(gòu)建及表達(dá)

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202011395245.0
• 申請日: 2020-12-03
• 公開（公告）號: CN112480238A
• 公開（公告）日: 2021-03-12
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 高鳳山;胡曉
• 申請（專利權(quán)）人: 大連大學(xué)
• 主分類號: C07K14/705
• 分類號: C07K14/705;C12N15/867;C12N5/10
• 代理公司: 大連智高專利事務(wù)所(特殊普通合伙) 21235
• 代理人: 胡景波

煙臺黑豬SLA?2基因真核表達(dá)細(xì)胞系的構(gòu)建及表達(dá)，屬于基因領(lǐng)域。本發(fā)明選擇煙臺黑豬為研究對象，在實驗室前期已經(jīng)成功構(gòu)建煙臺黑豬SLA?2?YT/pMD18?T全基因克隆表達(dá)載體的工作基礎(chǔ)上，構(gòu)建煙臺黑豬SLA?2?YT編碼區(qū)基因的真核表達(dá)載體，并使其在sT2細(xì)胞系中高度表達(dá)，為探究煙臺黑豬SLA?2?YT基因的遺傳特性、蛋白功能活性及表位遞呈規(guī)律等奠定基礎(chǔ)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于基因領(lǐng)域，具體涉及煙臺黑豬SLA-2基因真核表達(dá)細(xì)胞系的構(gòu)建及表達(dá)。

背景技術(shù)

主要組織相容性復(fù)合體(major histocompatibility complex,MHC)是染色體上由高度多態(tài)、緊密連鎖的基因座位組成的一個遺傳區(qū)域，上世紀(jì)40年代，Snell等人在對近交系小鼠進(jìn)行免疫試驗時首先發(fā)現(xiàn)了MHC基因，自此，與MHC相關(guān)的研究引起了科技工作者的興趣^[1]。MHC基因的編碼產(chǎn)物分布于細(xì)胞膜上，是免疫系統(tǒng)中非常重要且極具多態(tài)性的一類細(xì)胞表面轉(zhuǎn)膜蛋白，稱為MHC抗原^[2_,^3]，根據(jù)其分布區(qū)域、化學(xué)結(jié)構(gòu)和功能的差異可分為3類，分別是MHC I、MHC II和MHC III。MHC廣泛分布于幾乎所有的脊椎動物體內(nèi)，不同動物的MHC有不同的命名方法，豬的MHC也叫豬白細(xì)胞抗原(swine leukocyte antigen,SLA)。1970年，Vaiman等人^[4-6]首次發(fā)現(xiàn)SLA，Viza等人^[5]還發(fā)現(xiàn)SLA在抗原遞呈、免疫應(yīng)答等方面發(fā)揮重要作用。豬是接近人類的模式動物，因此引起了人們對SLA研究的極大興趣^[7,8]。深入研究SLA基因的表達(dá)和功能，不僅可以為異種移植治療人類疾病提供可能，也為獸醫(yī)臨床領(lǐng)域的細(xì)胞免疫治療、分子表位疫苗的研制提供理論基礎(chǔ)。與人的MHC一樣，SLA由3個基因簇組成，分別是SLAI、II、III。SLAI類分子包括重鏈和輕鏈，對豬的免疫系統(tǒng)至關(guān)重要^[9]。輕鏈不具有多態(tài)性，只有一個等位基因β2m；重鏈具有多態(tài)性,包括胞內(nèi)區(qū)、跨膜區(qū)、胞外區(qū)和信號肽四個區(qū)域，含有SLA-1、SLA-2和SLA-3三個功能性基因^[10,11]，其中，SLA-2比SLA-1和SLA-3在信號肽的起始端多3個氨基酸，可在體外結(jié)合抗原。重鏈與輕鏈以非共價鍵結(jié)合構(gòu)成SLAI類分子，在細(xì)胞內(nèi)主要識別內(nèi)源性抗原肽^[12]，另外發(fā)現(xiàn)它也可以通過交叉遞呈途徑識別外源性抗原肽^[13]。被識別的多肽與SLAI類分子的重鏈和輕鏈形成抗原肽-MHC分子復(fù)合物(pMHC)并被遞呈到細(xì)胞表面，此三分子復(fù)合物進(jìn)一步與CD8+T淋巴細(xì)胞表面的T細(xì)胞受體(Tcell receptor,TCR)結(jié)合，激活CD8+T淋巴細(xì)胞，使活化的CD8+T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化為有細(xì)胞毒性的T淋巴細(xì)胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)，發(fā)揮毒性作用并對靶細(xì)胞造成殺傷，啟動機(jī)體的細(xì)胞免疫應(yīng)答^[14]。據(jù)此，可以借助SLAI類分子來進(jìn)行CTL多肽表位的篩選。由于SLAI類分子的重鏈極具多態(tài)性，如果豬的品系不同，其遞呈外源性抗原肽的規(guī)律也會有差異，所以有必要建立不同品系豬SLA I類分子表位遞呈規(guī)律的研究平臺。煙臺黑豬經(jīng)過長期的自然選擇和風(fēng)土馴化，具有良好的種質(zhì)特性，如適應(yīng)性強(qiáng)、產(chǎn)仔數(shù)多、哺乳率高、抗病力強(qiáng)、耐粗飼、成熟早、風(fēng)味獨(dú)特、肉質(zhì)細(xì)嫩等，是我國優(yōu)良的地方豬種之一，保護(hù)并開發(fā)好地方豬品種，保護(hù)和利用好其寶貴的基因資源具有十分重要的意義^[15,16]。SLA-2基因?qū)儆赟LA-I類分子重要的功能基因，本實驗室已完成煙臺黑豬SLA-2基因克隆，姜巍、董宋鵬等人構(gòu)建了煙臺黑豬SLA-2基因的原核表達(dá)載體，并對其進(jìn)行了誘導(dǎo)表達(dá)^[17]。但是，目前煙臺黑豬SLA-2基因真核表達(dá)研究尚未開展，其表位遞呈規(guī)律研究平臺也尚未建立。

參考文獻(xiàn)：

[1]Snell G D.Methods for the study of histocompatibility genes[J].JGenet,1948,49(2):87-108.