[發明專利]LC-MS/MS法測定人血漿中卡格列凈濃度的方法

在審

• 申請號: 202011393774.7
• 申請日: 2020-12-03
• 公開（公告）號: CN112697932A
• 公開（公告）日: 2021-04-23
• 發明（設計）人: 黎明;尹小麗
• 申請（專利權）人: 湖南泰新醫藥科技有限公司
• 主分類號: G01N30/06
• 分類號: G01N30/06;G01N30/88
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明屬于醫藥檢測技術領域，具體公開了一種LC?MS/MS法測定人血漿中卡格列凈濃度的方法，本方法具有較高的特異性，能準確測定血漿中的卡格列凈的濃度，靈敏度較高，卡格列凈的血漿最低定量限為50ng/mL。本方法卡格列凈的血漿標準曲線線性范圍為50～8000ng/mL，批內和批間精密度RSD均小于±10％。本發明方法重現性好，準確度高；解決了基質效應，不受基質、高血脂基質和溶血基質的干擾，不同人群的血漿對本發明方法無干擾現象，可用于臨床大批量樣品分析需求。

技術領域

本發明涉及醫藥檢測技術領域，具體涉及一種LC-MS/MS法測定人血漿中卡格列凈濃度的方法。

背景技術

卡格列凈，英文名為Canagliflozin，是由強生原研的強效、可逆的高選擇性人體腎臟鈉葡萄糖共轉運體(SGLT2)抑制劑，通過抑制腎臟對葡萄糖的重吸收作用，促進葡萄糖經尿液排泄，從而降低血糖。2013年3月，獲得美國FDA批準上市，該藥以商品名登錄美國市場；2013年11月，獲得歐盟EMA批準上市；2014年7月獲得日本PMDA的批準。目前，我國CFDA公布的卡格列凈共有兩個注冊證號，均為楊森制藥的規格分別為100mg和300mg。卡格列凈是一種新型的口服治療糖尿病的藥物，在體內可有效地競爭抑制鈉-葡萄糖協同轉運蛋白2(SGLT2)，從而抑制鈉-葡萄糖協同運輸以降低高血糖?？ǜ窳袃羰荢GLT2抑制劑，是首個獲批的該類型糖尿病治療藥物，SGLT2主要在腎近端小管處表達，主要負責濾過到腎小管內的葡萄糖的重吸收?？ǜ窳袃敉ㄟ^抑制SGLT2，減少濾過到腎小管的葡萄糖的重吸收，降低腎糖閾，增加葡萄糖通過尿液排泄。其作用機制不同于其它已上市的降糖藥，所以卡格列凈可與其它降糖藥聯合使用從而增強降糖作用，改善Ⅱ型糖尿病患者的血糖控制。

現有的卡格列凈有關物質高效液相分析方法有：儀器：API3200；流動相：乙腈-0.1％甲酸水(90:10V/V)；流速0.2ml/min；色譜柱：Quicksorb ODS(2.1mm*150mm，5μm)。處理步驟：取用100μL血漿，加入10μL內標工作液，再加入100μL乙腈沉淀，渦旋15S混勻，加入1mL叔丁基甲基醚，渦旋30S以上，12000rpm離心15min。離心后取上清液轉移至干凈的離心管中，在60℃條件下氮氣吹干，100Μl流動相復溶，渦旋30秒，30μL進樣分析。上述方法并不能應用到檢測人血漿中卡格列凈血藥濃度上來，且樣品分析時間較長，具有一定的局限性。

國外期刊雜志有相關報道，其中對于卡格列凈血藥濃度檢測的方法為：儀器：API3200；流動相：乙腈-0.1％甲酸水(90:10V/V)；流速0.2ml/min；色譜柱：Quicksorb ODS(2.1mm*150mm，5μm)。處理步驟：取用100μL血漿，加入10μL內標工作液，再加入100μL乙腈沉淀，渦旋15S混勻，加入1mL叔丁基甲基醚，渦旋30S以上，12000rpm離心15min。離心后取上清液轉移至干凈的離心管中，在60℃條件下氮氣吹干，100μL流動相復溶，渦旋30秒，30μL進樣分析。該方法操作步驟繁雜，需氮吹復溶，且耗用血漿用量大。

發明內容

為解決上述技術問題，本發明的目的在于提供一種LC-MS/MS法測定人血漿中卡格列凈濃度的方法，可檢測人血漿中卡格列凈，樣品分析時間較短且檢測時間短，實現在短時間內準確測定出人血漿中卡格列凈濃度。

為了解決上述技術問題，本發明采用如下技術方案：

一方面，本發明提供一種LC-MS/MS法測定人血漿中卡格列凈濃度的方法，包括如下步驟：提取血漿中的卡格列凈，得到提取液；將提取液采用高效液相色譜串聯質譜(LC-MS/MS)進行定性定量測定。

進一步地，所述高效液相色譜串聯質譜的液相色譜條件包括：

色譜柱：Waters XTERRA MS C18(2.1×50mm，5micron)；

保護柱：Gemini C18(4×3.0mm，Phenomenex，USA)；