[發明專利]一種CHO-DHFR+細胞株及其應用有效
| 申請號： | 202011393700.3 | 申請日： | 2020-12-03 |
| 公開（公告）號： | CN112501126B | 公開（公告）日： | 2023-04-07 |
| 發明（設計）人： | 喬磊;楊盼盼;鄭彬彬;王建剛;吳明遠 | 申請（專利權）人： | 康立泰生物醫藥（青島）有限公司 |
| 主分類號： | C12N5/10 | 分類號： | C12N5/10;C07K14/54;C12N15/85 |
| 代理公司： | 北京三友知識產權代理有限公司 11127 | 代理人： | 劉鑫;韓蕾 |
| 地址： | 266111 山東省青島市高新區河東*** | 國省代碼： | 山東;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 cho dhfr 細胞株 及其 應用 | ||
【權利要求書】：
1.一種CHO-DHFR+細胞株，該細胞株的保藏編號為CCTCC?NO：C2019264。
2.權利要求1所述CHO-DHFR+細胞株在表達重組蛋白中的應用。
3.根據權利要求2所述的應用，其中，所述重組蛋白包括重組IL-10。
4.一種表達重組IL-10的工程細胞株的構建方法，其包括以下步驟：
將優化后的IL-10基因連接至pcDNA3.1-β質粒上，構建獲得重組質粒載體；所述優化后的IL-10基因的核苷酸序列如SEQ?ID?NO：1所示；所述重組質粒載體的核苷酸序列如SEQ?IDNO：7所示；
采用脂質體2000將重組質粒載體轉染進入權利要求1所述CHO-DHFR+細胞株中，得到表達重組IL-10的工程細胞株。
5.權利要求4所述構建方法構建獲得的表達重組IL-10的工程細胞株。
6.一種利用權利要求5所述表達重組IL-10的工程細胞株培養表達重組IL-10的方法，其包括以下步驟：
將權利要求5所述的表達重組IL-10的工程細胞株采用含有G418的CD?OptiCHO培養基培養，表達獲得重組IL-10。
7.根據權利要求6所述的方法，其中，所述重組IL-10的瞬轉表達量大于0.96mg/L。
8.根據權利要求6所述的方法，其中，每ml含有G418的CD?OptiCHO培養基中，所述G418的質量為200～700μg。
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