[發明專利]耐氧化脅迫的短雙歧桿菌grx201及其應用

有效

• 申請號: 202011391809.3
• 申請日: 2020-12-02
• 公開（公告）號: CN112442464B
• 公開（公告）日: 2022-09-02
• 發明（設計）人: 顧瑞霞;胡鵬鈺;張臣臣;王鵬;于俊娟;瞿恒賢;桂亞
• 申請（專利權）人: 揚州大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A23C9/12;A23C9/152;A23L2/38;A23L33/135;C12R1/01
• 代理公司: 南京理工大學專利中心 32203
• 代理人: 鄒偉紅;劉海霞

本發明公開了一株耐氧化脅迫的短雙歧桿菌grx201及其應用。短雙歧桿菌grx201能夠在常規有氧環境下生長，保藏編號為CGMCC NO.20929。本發明的短雙歧桿菌grx201在常規培養條件下活菌高于10⁹CFU/mL，達到了厭氧培養條件下的92％，在實際應用過程中，能夠大幅降低對生產設備、產品包裝和消費過程的厭氧需求，在益生菌制品領域具有廣泛的應用前景。

技術領域

本發明涉及食品生物技術領域，涉及一株耐氧化脅迫的短雙歧桿菌grx201及其應用。

背景技術

雙歧桿菌屬和乳桿菌屬是目前主要的可應用于食品的益生菌。雙歧桿菌是人體正常菌種之一，是嬰兒腸道的優勢菌群。大量研究表明雙歧桿菌具有調整腸道菌群、調節免疫、防治腹瀉等益生功能。雙歧桿菌屬占有嬰幼兒益生菌市場的大半份額。

短雙歧桿菌具有耐胃酸和耐膽汁性能，可長時間定殖于人體內。將雙歧桿菌應用于發酵乳和發酵飲品等發酵食品，并利用生物技術提高產品品質和穩定性，能夠降低益生菌攝入成本，提升益生菌攝入體驗，有助于促進功能食品大眾化，提升消費者身體素質。但是雙歧桿菌屬于嚴格厭氧微生物，其活性在生產、運輸、貯藏和消費過程中極易受到氧化脅迫的損傷，活菌數較低，益生功能難有保障。采用耐氧化脅迫的雙歧桿菌，能夠降低食品生產、運輸和貯藏過程中的設備要求，減少消費過程中菌體活性的損失。現有研究表明，耐氧化脅迫的雙歧桿菌多屬于B. choerinum和B. boum等未進入國家允許使用在食品中的菌種。國內抗氧化研究多集中于菌株對活性氧簇的清除能力，較少研究菌株本身在氧化環境中的生長能力；國外比較耐氧化能力的相對生長能力法測定菌株的光學密度，未對活菌數量作出直接比較。

發明內容

本發明的目的在于提供一株生長能力強，耐酸特性好，且能夠在非厭氧條件下存活并生長的耐氧化脅迫的短雙歧桿菌。

發明人以氧脅迫較強的健康人體的乳汁為菌源篩選雙歧桿菌，對生長能力較強的雙歧桿菌分別進行模擬人工胃液（pH 2.5）和0.1%膽鹽耐性實驗，篩選對胃腸道環境耐性較強的菌株，最后將菌株在常規氧化環境下進行培養，獲得一株可在常規環境下生長的短雙歧桿菌菌株，命名為短雙歧桿菌grx201(Bifidobacterium brevegrx201) 。該菌株已于2020年10月21日保藏于中國普通微生物菌種保藏管理中心，保藏地址為中國北京市朝陽區北辰西路1號院3號，保藏編號為CGMCC NO.20929。

本發明還提供上述短雙歧桿菌grx201的培養方法，具體步驟如下：將短雙歧桿菌grx201接種至改良MRS液體培養基中，初始培養pH為6.5，培養溫度為37℃，厭氧培養。

本發明中，所述的改良MRS液體培養基的配方為：蛋白胨10.0 g/L，牛肉浸粉8.0g/L，酵母浸粉4.0 g/L，葡萄糖20.0 g/L，磷酸氫二鉀2.0 g/L，檸檬酸氫二銨2.0 g/L，乙酸鈉5.0 g/L，硫酸鎂0.2 g/L，硫酸錳0.04 g/L，吐溫80 1.0 g/L，莫匹羅星鋰鹽50 mg/L，半胱氨酸鹽酸鹽500 mg/L，水。

進一步地，本發明提供上述短雙歧桿菌grx201在制備益生菌制品中的應用。

本發明中，所述的益生菌制品為食品醫藥領域常規的益生菌制品，包括但不限于發酵乳、乳飲料、活菌制劑、發酵果蔬飲料等。

與現有技術相比，本發明具有以下優點：

本發明的短雙歧桿菌grx201在24小時內可達到穩定期，耐模擬人工胃液和0.1%膽鹽的能力分別達到65%和70%。在常規培養條件下活菌高于10⁹ CFU/mL，達到了厭氧培養條件下的92%，遠高于最著名的動物雙歧桿菌乳亞種bb-12（文獻數據為29.4%）。本發明的短雙歧桿菌grx201在應用過程中，能夠大幅降低對生產設備、產品包裝和消費過程的厭氧需求，在益生菌制品領域具有廣泛的應用前景。