[發明專利]一種用于檢測生物酶的比率型單苯環熒光探針及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 202011390244.7
• 申請日: 2020-12-01
• 公開（公告）號: CN112574030B
• 公開（公告）日: 2022-07-15
• 發明（設計）人: 袁智勤;張凱;田明策
• 申請（專利權）人: 北京化工大學
• 主分類號: C07C67/08
• 分類號: C07C67/08;C07C69/16;C07C271/44;C07C69/76;C07C269/00;C07F9/12;C09K11/06;G01N21/64
• 代理公司: 北京太兆天元知識產權代理有限責任公司 11108
• 代理人: 王宇

1.一種用于檢測生物酶的比率型單苯環熒光探針，其特征在于，所述的單苯環熒光探針的結構式如下：

2.一種用于檢測生物酶的比率型單苯環熒光探針的制備方法，其特征在于，所述的制備方法的具體步驟為：

(1)將4,6-二羥基間苯二甲酸或2,5-二羥基對苯二甲酸分別進行羧基保護反應；

(2)將步驟(1)得到的羧基保護產物分別進行磷酸化反應、酰胺化反應、酯化反應；

(3)將步驟(2)得到的產物分別進行解保護反應，相應得到式(Ⅰ)、式(Ⅱ)、式(Ⅲ)、式(Ⅳ)、式(Ⅴ)、式(Ⅵ)所示的用于檢測生物酶的比率型單苯環熒光探針：

3.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，步驟(1)所述的羧基保護反應的具體操作步驟為：向含有4,6-二羥基間苯二甲酸或2,5-二羥基對苯二甲酸的圓底燒瓶中加入無水DMF和NaHCO₃，室溫下攪拌10-30分鐘；然后加入芐基溴，55-60℃下攪拌反應2-8小時后用水淬滅反應，用DCM萃取有機化合物，合并有機層，用飽和鹽水洗滌，無水Na₂SO₄干燥，過濾，最后旋轉蒸發除去溶劑得到羧基保護產物；其中4,6-二羥基間苯二甲酸或2,5-二羥基對苯二甲酸、NaHCO₃和芐基溴的摩爾比為1:2-4:3-5。

4.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，步驟(2)所述的磷酸化反應的具體操作步驟為：向步驟(1)得到的羧基保護產物的THF溶液中加入CCl₄，冷卻至0℃，然后在N₂下滴加N,N-二異丙基乙胺，混合攪拌10-30分鐘后逐滴加入4-二甲基氨基吡啶和磷酸二芐基酯的THF溶液，滴加完成后加熱至室溫攪拌反應2-8小時；用磷酸二氫鈉的磷酸鹽緩沖液淬滅反應，繼續攪拌10-50分鐘，最后用DCM萃取，用鹽水洗滌有機層，無水Na₂SO₄干燥，過濾，蒸發除去溶劑，使用洗脫劑純化殘余物；其中步驟(1)得到的羧基保護產物、CCl₄、N,N-二異丙基乙胺、4-二甲基氨基吡啶和磷酸二芐基酯的摩爾比為1:8-12:0.5-1.5:0.08-0.2:1-3。

5.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，步驟(2)所述的酰胺化反應的具體操作步驟為：在0-(-20)℃，向步驟(1)得到的羧基保護產物的THF溶液中加入4-二甲基氨基吡啶和二乙基氨基甲酰氯，然后加熱至室溫并攪拌反應2-8小時，用磷酸二氫鈉的磷酸鹽緩沖液淬滅反應，繼續攪拌10-50分鐘，最后用DCM萃取，用鹽水洗滌有機層，無水Na₂SO₄干燥，過濾，蒸發除去溶劑，使用洗脫劑純化殘余物；其中步驟(1)得到的羧基保護產物、4-二甲基氨基吡啶和二乙基氨基甲酰氯的摩爾比為1:1-3:1-2。

6.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，步驟(2)所述的酯化反應的具體操作步驟為：向步驟(1)得到的羧基保護產物的THF溶液中滴加N,N-二異丙基乙胺，攪拌10-50分鐘后繼續滴加含有4-二甲基氨基吡啶和乙酸酐的THF溶液，攪拌反應2-8小時，用磷酸二氫鈉的磷酸鹽緩沖液淬滅反應，繼續攪拌10-50分鐘，最后用DCM萃取，用鹽水洗滌有機層，無水Na₂SO₄干燥，過濾，蒸發除去溶劑，使用洗脫劑純化殘余物；其中步驟(1)得到的羧基保護產物、N，N-二異丙基乙胺、4-二甲基氨基吡啶和乙酸酐的摩爾比為1:0.5-2:1-3:1-3。

7.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，步驟(3)所述的解保護反應的具體操作步驟為：向磷酸化反應產物的甲醇溶液中添加催化劑Pd/C，在室溫下攪拌反應1-5天，過濾除去催化劑，甲醇洗滌，蒸發除去溶劑，最后用乙醚洗滌。