[發明專利]分離檢測葉酸中葉酸及葉酸光學異構體的方法

有效

• 申請號: 202011390239.6
• 申請日: 2020-12-02
• 公開（公告）號: CN112649524B
• 公開（公告）日: 2022-05-17
• 發明（設計）人: 周書榮;李冰潔;陳雯;杜帥;蘭昌云;劉闊
• 申請（專利權）人: 重慶華邦勝凱制藥有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/86
• 代理公司: 北京元本知識產權代理事務所(普通合伙) 11308
• 代理人: 黎昌莉

1.從葉酸及相關雜質中分離葉酸和/或葉酸光學異構體的方法，其特征在于，所述方法采用的色譜柱是以硅膠表面共價鍵合O-9-(叔丁基氨基甲酰)奎寧為填料，采用流動相A和流動相B將所述葉酸和/或葉酸光學異構體從所述葉酸及相關雜質中進行分離；所述流動相A為有機溶液，所述有機溶液為甲醇和乙腈的混合溶液；所述流動相B為有機酸和三乙胺的混合溶液；所述流動相A和流動相B中甲醇、乙腈、醋酸和三乙胺的體積比為50:50:3:3；所述相關雜質為雜質A～H、雜質SM1d、雜質SM1k、葉酸光學異構體；所述葉酸和相關雜質的結構式如下：

2.根據權利要求1中所述的方法，其特征在于，所述流動相流速為0.4～0.6ml/min。

3.根據權利要求1中所述的方法，其特征在于，所述色譜柱柱溫為20～30℃。

4.鑒定葉酸及相關雜質中葉酸和/或葉酸光學異構體的方法，其特征在于，利用權利要求1中所述方法將檢測物中所述葉酸和/或葉酸光學異構體從所述葉酸及相關雜質中分離，通入檢測器進行檢測，將檢測得到的色譜圖與已知葉酸和/或葉酸光學異構體對照品色譜圖進行對比，判定檢測物中是否含有所述葉酸和/或葉酸光學異構體；所述相關雜質為權利要求1中所述相關雜質；所述檢測器波長設定為280±10nm。

5.測定葉酸及相關雜質中葉酸和/或葉酸光學異構體含量的方法，其特征在于，利用權利要求4所述的方法，得到色譜圖；利用峰面積歸一化法測得所述葉酸和/或葉酸光學異構體的含量。

6.根據權利要求5中所述的方法，其特征在于，所述方法包含如下步驟：

1)配制檢測品溶液、對照品溶液；

取供檢測品溶于稀釋劑中，得檢測品溶液；取所述葉酸和/或葉酸光學異構體標準品，用稀釋劑溶解制成對照品溶液；

2)分離；

利用權利要求1中所述的方法，將檢測品中葉酸和/或葉酸光學異構體從葉酸和相關雜質中分離；

3)鑒定；

利用權利要求4中所述的方法，鑒定所述檢測品中是否含有所述葉酸和/或葉酸光學異構體；

4)含量計算；

根據鑒定過程中得到的色譜圖，按峰面積歸一化法測定檢測品溶液中所述葉酸和/或葉酸光學異構體的含量。

7.根據權利要求6中所述的方法，其特征在于，步驟1)中所述稀釋劑為四氫呋喃、甲醇、水、醋酸、三乙胺的混合溶液，其體積比為10:80:10:2.4:3。