[發明專利]一種利用干熱大豆分離蛋白為模型分析雜環胺形成機理的方法有效
| 申請號： | 202011389930.2 | 申請日： | 2020-12-02 |
| 公開（公告）號： | CN112557361B | 公開（公告）日： | 2023-08-18 |
| 發明（設計）人： | 席俊;陳陽;付楊;陳慧彬;汪學德;馬宇翔 | 申請（專利權）人： | 河南工業大學 |
| 主分類號： | G01N21/64 | 分類號： | G01N21/64;G01N21/33;G01N21/25;G01N30/02;G01N30/06;G01N30/86 |
| 代理公司： | 鄭州市華翔專利代理事務所(普通合伙) 41122 | 代理人： | 張愛軍 |
| 地址： | 450001 河南*** | 國省代碼： | 河南;41 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 利用 大豆 分離 蛋白 模型 分析 雜環胺 形成 機理 方法 | ||
1.一種利用干熱大豆分離蛋白為模型分析雜環胺形成機理的方法，其特征在于，包括以下步驟：
(1)對大豆分離蛋白進行干熱處理，并對干熱大豆分離蛋白的可溶性蛋白濃度進行測定；
(2)對干熱大豆分離蛋白進行酸水解，得到雜環胺；結合固相萃取法對雜環胺進行純化，濃縮后，采用液相色譜質譜聯用儀進行雜環胺含量的測定；
(3)使用SDS-PAGE凝膠分析干熱大豆分離蛋白的變化；
(4)使用圓二色光譜分析干熱大豆分離蛋白的二級結構，使用熒光分光光度計分析干熱大豆分離蛋白的三級結構；
(5)使用熒光分光光度計分析干熱大豆分離蛋白的氧化程度；
(6)使用紫外-可見分光光度計分析干熱大豆分離蛋白的降解程度；
(7)使用高效液相色譜分析干熱大豆分離蛋白熱解過程中甲醛、乙醛的含量變化；
(8)使用清除PTIO自由基評價干熱大豆分離蛋白體系的抗氧化性變化。
2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟(1)干熱處理在鼓風干燥箱中進行。
3.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟(2)選用6M鹽酸進行酸水解；固相萃取時洗脫液在35℃條件下使用氮氣吹干。
4.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟(3)使用熒光素-5-氨基硫脲標記羰基蛋白來可視化蛋白氧化程度及氧化位點。
5.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟(4)的分析方法為：使用熒光分光光度計分析內源熒光光譜，獲得最大熒光強度及最大熒光所處波長；使用圓二色光譜儀測定遠紫外區CD譜。
6.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟(5)的分析方法為：使用熒光分光光度計測定共軛席夫堿和N-甲酰基犬尿氨酸的含量。
7.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟(6)的分析方法為：通過茚三酮與氨基的反應，建立以丙氨酸為標準的總氨基標準曲線，測定干熱大豆分離蛋白中總氨基的含量變化。
8.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟(7)的分析方法為：使用2，4-二硝基苯肼衍生甲醛、乙醛，并用高效液相色譜在360nm下分離甲醛、乙醛，定量分析干熱大豆分離蛋白熱解過程中甲醛、乙醛的含量變化。
9.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟(8)的分析方法為：建立PTIO標準曲線，及Trolox清除PTIO自由基標準曲線，測定干熱大豆分離蛋白體系的抗氧化性。
10.如權利要求1所述的方法在使用大豆分離蛋白制備熱加工食品方面的應用。
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