[發明專利]一種圍產期間充質干細胞種子庫的構建方法

在審

• 申請號: 202011388141.7
• 申請日: 2020-12-01
• 公開（公告）號: CN112481203A
• 公開（公告）日: 2021-03-12
• 發明（設計）人: 王曉宇;李崴;郭康合;林冠妃;王岱桑;張萬程;李秋宛;陳多峰
• 申請（專利權）人: 海南優尼科爾生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775;A01N1/02
• 代理公司: 北京盛凡智榮知識產權代理有限公司 11616
• 代理人: 葉似錦

本發明公開了一種圍產期間充質干細胞種子庫的構建方法，包括產婦篩查、樣本采集、樣本檢測、樣本預處理、分離制備、原代培養、傳代培養、細胞檢測、細胞凍存、建立可供檢索的細胞信息檔案、編碼入庫并上傳細胞信息檔案。本發明屬于細胞庫構建的技術領域，具體是指一種可以提高干細胞的安全性，簡化操作步驟的圍產期間充質干細胞種子庫的構建方法。

技術領域

本發明屬于細胞庫構建的技術領域，具體是指一種圍產期間充質干細胞種子庫的構建方法。

背景技術

干細胞治療技術是近年來生命科學領域的新興技術，已經被應用到了多種難治性疾病的治療研究中，并取得了積極的進展。目前，全球干細胞治療市場可分為地中海貧血、腦癱、糖尿病、白血病、自閉癥等等。隨著糖尿病等許多疾病的發病率逐年攀升，增加了對干細胞的臨床需求，從而推動了干細胞治療市場的發展。根據全球知名調研機構Technavio發布的報告，全球干細胞治療市場有望在2020年至2024年間增長5.8億美元左右，預計將以7％的復合年增長率增長。由此可見，臨床需求的增加給干細胞的市場發展帶來了更大的空間。

間充質干細胞(mesenchymal stem cell，MSC)為干細胞家族重要成員之一，起源于早期發育的中、外胚層，是一種具有自我更新能力和多向分化潛能的成體干細胞，它來源廣泛、取材方便、可以大規模擴增，同時具有造血支持及免疫調節功能，使其成為最有前途的臨床使用種子細胞。

隨著近年來間充質干細胞全領域的快速發展，建立并優化間充質干細胞建庫方法，對于開展干細胞研究、推動其臨床應用都具有重要意義。

發明內容

為了解決上述難題，本發明提供了一種可以提高干細胞的安全性，簡化操作步驟的圍產期間充質干細胞種子庫的構建方法。

為實現上述目的，本發明采取的技術方案如下：一種圍產期間充質干細胞種子庫的構建方法，包括如下步驟：

1)產婦篩查；

2)樣本采集；

3)樣本檢測；

4)樣本預處理；

5)細胞分離制備；

6)原代培養；

7)傳代培養；

8)細胞檢測；

9)細胞凍存；

10)建立可供檢索的細胞信息檔案；

11)編碼入庫并上傳細胞信息檔案。

進一步地，所述步驟1)中產婦篩查是指在充分了解產婦及其丈夫家族病史及旅居史的情況符合供者條件后，取5ml產婦外周血及5ml臍血進行病原微生物檢測，包括但不限于乙肝、丙肝、梅毒、艾滋等傳染病檢測。

進一步地，所述步驟2)中樣本采集為將正常足月分娩健康新生兒胎盤、臍帶進行無菌采集；包括如下步驟：

1)在距臍帶兩端2-3cm處結扎；

2)剪下結扎好的臍帶置于裝有30-50ml儲存液的采集瓶中；

3)將去掉臍帶后的胎盤置于裝有400-600ml儲存液的采集盒中。

進一步地，所述儲存液為含40UI/ml慶大霉素的生理鹽水。

進一步地，所述步驟3)中樣本檢測為對胎盤、臍帶進行無菌檢測，包括但不限于支原體、真菌、細菌、微生物等，具體的為取儲存液及清洗液(即步驟4中最后一步清洗用生理鹽水)進行檢測。

進一步地，所述步驟4)中樣本預處理包括如下步驟：

1)將樣本在生理鹽水中洗凈殘血；