[發(fā)明專利]一種3’-磷酸酯核苷的制備方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011387855.6
• 申請(qǐng)日: 2020-12-01
• 公開（公告）號(hào): CN112409421A
• 公開（公告）日: 2021-02-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王晨;楊陽(yáng);阮洋庭;李文強(qiáng);姚峰
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海兆維科技發(fā)展有限公司;上海兆維生物工程有限公司
• 主分類號(hào): C07H1/02
• 分類號(hào): C07H1/02;C07H19/20;C07H19/10;C07H21/02;C07H21/04;C07H1/00
• 代理公司: 上海專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 31100
• 代理人: 張睿

本發(fā)明公開了一種3’?磷酸酯核苷的制備方法。所述方法包括步驟：將結(jié)構(gòu)如式(a)所示的化合物與縛酸劑和P?(2?氰基乙基)?N，N?二異丙基磷酰氯混合，反應(yīng)得到3’?磷酸酯核苷。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及化學(xué)合成領(lǐng)域，具體涉及一種3’-磷酸酯核苷的合成方法。

背景技術(shù)

針對(duì)天然的寡核苷酸進(jìn)行固相合成時(shí)，首先要將亞磷酰胺溶于干燥的乙腈，形成乙腈溶液，該溶液會(huì)進(jìn)行多次合成，通常會(huì)使用好幾天以上。研究發(fā)現(xiàn)，亞磷酰胺在乙腈中長(zhǎng)時(shí)間放置，會(huì)發(fā)生Michaelis-Arbuzov重排反應(yīng)，三價(jià)的亞磷酰胺會(huì)部分轉(zhuǎn)化成五價(jià)的磷酸酯產(chǎn)物，這種五價(jià)的磷酸酯產(chǎn)物在固相合成中沒有活性。因此，在固相合成中對(duì)此類副產(chǎn)物進(jìn)行雜質(zhì)定位分析就顯得尤其重要。通常情況下，要進(jìn)行對(duì)此類雜質(zhì)定位，首先要將目標(biāo)雜質(zhì)合成出來，然后再通過LC-MS和³¹P NMR進(jìn)行定位分析，從而確定是否是目標(biāo)雜質(zhì)。

目前已知的合成3’-磷酸酯核苷的方法是由Kumar小組報(bào)道的，將亞磷酰胺溶于無水乙腈中，再加入丙烯腈，反應(yīng)液升至55℃攪拌48-72小時(shí)，大約會(huì)有20％-40％的亞磷酰胺轉(zhuǎn)化為磷酸酯產(chǎn)物，將乙腈濃縮干得到粗品，通過反相柱制備得到合格的磷酸酯產(chǎn)物。所述合成方法的反應(yīng)過程如下反應(yīng)式(II)所示：

該方法反應(yīng)時(shí)間較長(zhǎng)，使用原料比較昂貴，且轉(zhuǎn)化率較低，生成的磷酸酯產(chǎn)物和亞磷酰胺原料極性相似，必須要通過反相柱才能分離出目標(biāo)產(chǎn)物，分離純化難度較大。

因此本領(lǐng)域迫切需要提供關(guān)于3’-磷酸酯核苷的更佳的合成方法。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明旨在提供一種能夠克服現(xiàn)有技術(shù)缺陷的3’-磷酸酯核苷制備方法。

在本發(fā)明的第一方面，提供一種結(jié)構(gòu)如式(b)所示的3’-磷酸酯核苷的制備方法，所述方法包括步驟：將結(jié)構(gòu)如式(a)所示的化合物與縛酸劑和P-(2-氰基乙基)-N，N-二異丙基磷酰氯混合，反應(yīng)得到3’-磷酸酯核苷；

其中，

R選自氫、氟、甲氧基、或甲氧基乙氧基；

Base表示堿基或修飾的堿基；

R¹表示羥基保護(hù)基。

在另一實(shí)施方式中，所述結(jié)構(gòu)如式(a)所示的化合物、縛酸劑和P-(2-氰基乙基)-N，N-二異丙基磷酰氯的摩爾比為1:3-1:1.5，優(yōu)選為1:3:1.5。

在另一實(shí)施方式中，所述反應(yīng)溫度為0-30℃。

在另一實(shí)施方式中，所述反應(yīng)時(shí)間為0.5-2小時(shí)。

在另一實(shí)施方式中，所述反應(yīng)在有機(jī)溶劑中進(jìn)行；所述有機(jī)溶劑選自二氯甲烷、乙腈、四氫呋喃、二甲基甲酰胺(DMF)。

在另一實(shí)施方式中，所述縛酸劑包括N,N-二異丙基乙胺(DIPEA)、三乙胺等。

在另一實(shí)施方式中，所述反應(yīng)在氮?dú)獗Ｗo(hù)下進(jìn)行。

在另一實(shí)施方式中，所述堿基選自腺嘌呤(A)、鳥嘌呤(G)、胞嘧啶(C)、胸腺嘧啶(T)、或尿嘧啶(U)。

在本發(fā)明的第二方面，提供一種通過如上所述的本發(fā)明提供的制備方法獲得的結(jié)構(gòu)如式(b)所示的3’-磷酸酯核苷。

在另一實(shí)施方式中，所述結(jié)構(gòu)如式(b)所示的3’-磷酸酯核苷為兩種非對(duì)映異構(gòu)體的混合物。

在本發(fā)明的第三方面，提供一種如上所述的本發(fā)明提供的結(jié)構(gòu)如式(b)所示的3’-磷酸酯核苷在固相合成寡核苷酸中的應(yīng)用。

具體實(shí)施方式