[發明專利]一種檢測MMP-14的電化學發光生物傳感器及其制備方法有效

申請號：	202011383493.3	申請日：	2020-12-01
公開（公告）號：	CN112649417B	公開（公告）日：	2021-10-29
發明（設計）人：	馬芬;孫利娜;段宇宏;喬新蕊	申請（專利權）人：	西北大學
主分類號：	G01N21/76	分類號：	G01N21/76;G01N27/26;G01N27/30;G01N27/327;G01N33/543;G01N33/573;G01N33/574
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摘要：
搜索關鍵詞：	一種檢測 mmp 14 電化學發光生物傳感器及其制備方法
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【說明書】：

本發明屬于一種檢測腫瘤標記物MMP?14的電化學發光生物傳感器及其制備方法，本發明得到的檢測MMP?14的電化學發光生物傳感器，當傳感器與MMP?14相互作用后，MMP?14因與Ap1發生同源二聚而結合到電極表面后可以通過與Ap2異源二聚化將信號探針Ap2?Ru結合到電極表面，隨著MMP?14濃度增大，結合到電極表面的Ap2?Ru濃度增大，電化學發光信號增強，基于此實現對MMP?14高選擇性和高靈敏度檢測；具有靈敏度高、選擇性高、穩定性高、成本低廉等優點。

技術領域

本發明屬于醫療器械領域，涉及一種檢測MMP-14的電化學發光生物傳感器及其制備方法。

背景技術

截至目前，癌癥仍然是世界范圍內最嚴重的致死原因。盡管人們竭盡全力開發新的檢測和治療方法，但仍有90％的患者死于癌細胞擴散引起的全身性疾病。據報道，基質金屬蛋白酶(MMPs)參與了多種癌細胞轉移、侵襲過程，且有研究表明某一種MMP的高表達與特定癌癥的發病率呈正相關，說明MMPs可能可以作為多種疾病的檢測標志物及治療靶點。因此，研發靈敏且精確的MMPs傳感技術對于癌癥的臨床診斷及治療具有重要意義。

目前報道了很多基于MMPs催化結構域(CAT)中篩選的MMPs特異性多肽的水解斷裂建立的熒光或電化學發光生物傳感技術用于對MMP-9,MMP-2,MMP-3和MMP-7進行定量檢測。但是，肽裂解片段與熒光分子或電活性分子結合段往往會產生非特異性吸附，從而產生假陽性信號。而且，這些傳感器受檢測原理限制往往是Signal OFF型，很可能由于固定不牢固導致信號分子脫落產生假信號，這些因素均會對傳感器的檢測靈敏度造成影響。所以，上述生物傳感技術因缺乏特異性，在臨床上難以應用于檢測活性位點導向的MMPs。

發明內容

為解決上述問題，本發明提供一種檢測MMP-14的電化學發光生物傳感器及其制備方法，能對MMP-14進行即時檢測，特異性強。

本發明是通過以下技術方案來實現：

一種檢測MMP-14的電化學發光生物傳感器的制備方法，包括如下步驟：

步驟1，制備基底材料C₆₀-Chit

步驟1.1，將C₆₀分散于超純水中，超聲后得到C₆₀水溶液；

步驟1.2，將殼聚糖溶解于醋酸溶液中，攪拌后得到膠狀殼聚糖溶液；

步驟1.3，將C₆₀水溶液與殼聚糖溶液混合攪拌后得到基底材料C₆₀-Chit；

步驟2，配置MMP-14特異性識別探針

步驟2.1，將多肽抑制劑溶解于Tris-HCl緩沖液中，得到MMP-14特異性識別的探針溶液，其中，多肽抑制劑的氨基酸序列為：GYPKSALR-Ahx-(EG)₃-Cys(Ap1)；

步驟3，電化學發光生物傳感器的組裝

步驟3.1，將C₆₀-Chit滴加到玻碳電極表面待其自然晾干，得到C₆₀-Chit/GCE電極；