[發(fā)明專利]一種檢測MMP-14的電化學(xué)發(fā)光生物傳感器及其制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202011383493.3
• 申請日: 2020-12-01
• 公開（公告）號: CN112649417B
• 公開（公告）日: 2021-10-29
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 馬芬;孫利娜;段宇宏;喬新蕊
• 申請（專利權(quán)）人: 西北大學(xué)
• 主分類號: G01N21/76
• 分類號: G01N21/76;G01N27/26;G01N27/30;G01N27/327;G01N33/543;G01N33/573;G01N33/574
• 代理公司: 西安利澤明知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 61222
• 代理人: 邢海杰

1.一種檢測MMP-14的電化學(xué)發(fā)光生物傳感器的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

步驟1，制備基底材料C₆₀-Chit；

步驟1.1，將C₆₀分散于超純水中，超聲后得到C₆₀水溶液；

步驟1.2，將殼聚糖溶解于醋酸溶液中，攪拌后得到膠狀殼聚糖溶液；

步驟1.3，將C₆₀水溶液與殼聚糖溶液混合攪拌后得到基底材料C₆₀-Chit；

步驟2，配置MMP-14特異性識別探針；

步驟2.1，將多肽抑制劑溶解于Tris-HCl緩沖液中，得到MMP-14特異性識別的探針溶液，其中，多肽抑制劑Ap1的氨基酸序列為：GYPKSALR-Ahx-(EG)₃-Cys；

步驟3，電化學(xué)發(fā)光生物傳感器的組裝；

步驟3.1，將C₆₀-Chit滴加到玻碳電極表面待其自然晾干，得到C₆₀-Chit/GCE電極；

步驟3.2，將GA滴加到C₆₀-Chit/GCE電極表面進行交聯(lián),然后用Tris-HCl緩沖溶液沖洗，得到GA/C₆₀-Chit/GCE電極,其中GA為戊二醛；

步驟3.3，將MMP-14特異性識別的探針溶液滴加到GA/C₆₀-Chit/GCE電極表面進行交聯(lián)，然后用Tris-HCl緩沖溶液沖洗，得到Ap1/GA/C₆₀-Chit/GCE電極；

步驟3.4，將BSA滴加到Ap1/GA/C₆₀-Chit/GCE電極表面進行封閉，封閉后用Tris-HCl緩沖溶液沖洗電極表面；

步驟3.5，制備信號探針，第二多肽抑制劑Ap2端頭的氨基與雙(聯(lián)吡啶)-4′-甲基-4羰基吡啶釕-N-琥珀酰亞胺酯雙六氟磷酸酯(Ru)進行酰胺化反應(yīng)合成信號探針Ap2-Ru；當MMP-14通過與Ap1同源二聚化結(jié)合到電極表面時，通過與Ap2異源二聚化將信號探針Ap2-Ru結(jié)合到電極表面。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測MMP-14的電化學(xué)發(fā)光生物傳感器的制備方法，其特征在于，步驟1.1中，C₆₀的質(zhì)量濃度為0.2-2mg/mL，超聲時間為20-30min。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測MMP-14的電化學(xué)發(fā)光生物傳感器的制備方法，其特征在于，步驟1.2中，殼聚糖的質(zhì)量濃度為0.5％，醋酸溶液的體積濃度為0.1％。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測MMP-14的電化學(xué)發(fā)光生物傳感器的制備方法，其特征在于，步驟1.3中，C₆₀水溶液與殼聚糖溶液混合時體積比為1:1，攪拌時間為40-60min。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測MMP-14的電化學(xué)發(fā)光生物傳感器的制備方法，其特征在于，步驟3.1中，C₆₀-Chit的質(zhì)量濃度為0.1-1mg/mL。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測MMP-14的電化學(xué)發(fā)光生物傳感器的制備方法，其特征在于，步驟3.2中，GA溶液的質(zhì)量濃度為5％，交聯(lián)時間為3-4h。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測MMP-14的電化學(xué)發(fā)光生物傳感器的制備方法，其特征在于，步驟3.3中，Ap1的濃度為3-50μM，交聯(lián)時間為12-15h。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測MMP-14的電化學(xué)發(fā)光生物傳感器的制備方法，其特征在于，步驟3.4中，BSA質(zhì)量濃度為0.5％-1％，封閉時間為30-60min。

9.一種檢測MMP-14的電化學(xué)發(fā)生傳感器，其特征在于，由權(quán)利要求1-8任一項所述的制備方法制得。